การกำหนดปริมาณวิตามินเอในเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ ปัญหาสมัยใหม่ของวิทยาศาสตร์และการศึกษา ระบบต้านอนุมูลอิสระแบบไม่มีเอนไซม์
ด้วยการศึกษาเชิงลึกเกี่ยวกับกระบวนการผลิตอาหารเข้มข้นและการอบแห้งผักเมื่อสร้าง คุณค่าทางโภชนาการผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปรวมถึงการตรวจสอบการผลิตผลิตภัณฑ์เสริมอาหารให้ตรวจสอบเนื้อหาของวิตามินต่อไปนี้: วิตามินซี ( วิตามินซี), B1 (ไทอามีน), B2 (ไรโบฟลาวิน), PP (กรดนิโคตินิก), แคโรทีน (โพรวิตามินเอ)
การเตรียมตัวอย่างเพื่อตรวจวัดวิตามินตัวอย่างผลิตภัณฑ์ทดสอบจะถูกจัดเตรียมทันทีก่อนการวิเคราะห์ เมื่อวิเคราะห์ผักและผลไม้สด ตัวอย่างในรูปแบบของส่วนตามยาวจะถูกตัดจากชิ้นงานแต่ละชิ้นด้วยมีดสแตนเลส ซึ่งสับอย่างรวดเร็วด้วยมีด (กะหล่ำปลี หัวหอม) หรือบนเครื่องขูด (มันฝรั่ง รากผัก) ผสมให้เข้ากัน และนำตัวอย่างอย่างน้อย 200 ตัวอย่างจากมวลที่เป็นเนื้อเดียวกันที่ได้ d ซึ่งถูกส่งไปวิจัยทันที
ผลเบอร์รี่สดและผลไม้ฉ่ำขนาดเล็กไม่ได้ถูกสับล่วงหน้า จากค่าเฉลี่ยตัวอย่างที่นำมาใส่ขวดโหลจาก สถานที่ที่แตกต่างกันผสมผลเบอร์รี่และผลไม้หลายๆ อย่างพร้อมกันและนำตัวอย่างมาวิเคราะห์ เมล็ดจะถูกลบออกจากผลไม้และผลเบอร์รี่ด้วยเมล็ดแล้วดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
ผลไม้และผักแห้งอย่างน้อย 50 กรัมถูกบดในเครื่องบดในห้องปฏิบัติการหรือด้วยกรรไกรแล้วเทวัสดุที่บดแล้วลงในขวดที่มีจุกปิดดิน นำตัวอย่างมาจากมวลที่ผสมอย่างทั่วถึงเพื่อการวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการ
อาหารเข้มข้นในปริมาณอย่างน้อย 200 กรัมถูกบดในโรงสีในห้องปฏิบัติการ ผสมและนำตัวอย่างไปวิเคราะห์
อาหารนมเสริมเข้มข้น (ในรูปแบบอัดก้อน) อย่างน้อย 100 กรัม บดและบดในครก ผสมให้เข้ากันแล้วนำตัวอย่างไปวิเคราะห์
ผลิตภัณฑ์ชนิดผงในปริมาณอย่างน้อย 50 กรัม ผสมให้เข้ากันก่อนเก็บตัวอย่างเพื่อการวิจัย
เมื่อศึกษาผลิตภัณฑ์ที่เป็นของเหลว น้ำซุปข้น และเนื้อครีม จะมีการเก็บตัวอย่างเพื่อการวิเคราะห์หลังจากผสมตัวอย่างอย่างละเอียดแล้ว
การกำหนดวิตามินซี
วิตามินซี กรดแอล-แอสคอร์บิก (C6H8O6) พบได้ใน ผลิตภัณฑ์อาหารในสองรูปแบบ: รีดิวซ์และออกซิไดซ์ (กรดดีไฮโดรแอสคอร์บิก)
เชิงปริมาณ วิธีการทางเคมีคำจำกัดความของกรดแอสคอร์บิกขึ้นอยู่กับคุณสมบัติรีดิวซ์ วิธีการหลักในการพิจารณาปริมาณวิตามินซีในยาและผลิตภัณฑ์อาหารคือการไทเทรตแบบอินโดฟีนอลหรือการไทเทรตแบบไอโอโดเมตริก รีเอเจนต์อินโดฟีนอลที่ใช้คือ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล สีฟ้าเมื่อไทเทรต กรดแอสคอร์บิกจะลดลงและกลายเป็นสารประกอบลิวโกไม่มีสี ความสมบูรณ์ของปฏิกิริยาจะพิจารณาจากสีของสารละลายทดสอบ สีชมพูเกิดจากตัวบ่งชี้ที่มากเกินไปซึ่งในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรดจะมีสีชมพู ปริมาณอินโดฟีนอลที่ใช้ในการไตเตรทจะกำหนดปริมาณวิตามินซีในผลิตภัณฑ์ สำหรับการไตเตรทแบบไอโอโดเมตริกจะใช้สารละลายโพแทสเซียมไอโอเดตโดยแป้งทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้
เมื่อพิจารณาวิตามินซีในผลิตภัณฑ์อาหาร จะใช้วิธีการไตเตรทอินโดฟีนอล: การอนุญาโตตุลาการ การใช้ไฮโดรเจนซัลไฟด์ และการควบคุม (แบบง่าย) การเลือกวิธีการขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของผลิตภัณฑ์ที่กำลังศึกษาและวัตถุประสงค์ของการวิเคราะห์
วิธีอนุญาโตตุลาการ (อินโดฟีนอลโดยใช้ไฮโดรเจนซัลไฟด์)
ตัวอย่างของผลิตภัณฑ์ภายใต้การศึกษาคือ 10-50 กรัม ขึ้นอยู่กับปริมาณวิตามินซีที่คาดหวัง ถ่ายด้วยความแม่นยำ 0.01 กรัม ในเชิงปริมาณโดยใช้สารละลาย 5% กรดน้ำส้มถ่ายโอนไปยังขวดปริมาตร (หรือทรงกระบอก) และด้วยกรดเดียวกัน ปริมาณในขวดจะถูกปรับเป็นปริมาตร 50-100 มล. เมื่อวิเคราะห์สารเข้มข้นและผักและผลไม้แห้ง ตัวอย่างปริมาณ 5-10 กรัมจะถูกบดในครกด้วยผงแก้วหรือทรายควอทซ์ 5-10 กรัม (กำจัดสิ่งเจือปนที่เป็นเหล็กในเบื้องต้น ล้างและเผา) และมีปริมาณเป็นสามเท่าของปริมาณ สารละลาย 5% สัมพันธ์กับกรดอะซิติกตัวอย่าง เมื่อบด ผลิตภัณฑ์ที่วิเคราะห์จะต้องถูกเคลือบด้วยกรดอะซิติกจนหมด ส่วนผสมที่บดละเอียดแล้วจะถูกทิ้งไว้ในปูนเพื่อผสมเป็นเวลา 10 นาที หลังจากนั้นสารที่อยู่ภายในปูนจะถูกเทลงในขวดวัดปริมาตร (หรือกระบอกสูบ) ผ่านช่องทาง ระวังอย่าให้ตะกอนถูกถ่ายโอน ล้างปูน กรวย และแท่งหลายครั้งด้วยสารละลายกรดอะซิติก 5% หลายครั้ง โดยปล่อยให้ตะกอนตกตะกอนในแต่ละครั้ง น้ำยาล้างจานจะถูกเทลงในสารละลายทดสอบในขวดวัดปริมาตร (หรือทรงกระบอก) และปรับเป็นปริมาตร 50-100 มล. ขึ้นอยู่กับขนาดของตัวอย่างที่นำมาและปริมาณวิตามินซีที่คาดหวัง ปริมาณบรรจุในขวดวัดปริมาตรหรือ กระบอกจะถูกผสมอย่างทั่วถึงและปั่นแยกหรือกรองอย่างรวดเร็วผ่านชั้นสำลี
สารสกัดกรดอะซิติกที่ได้ 10 มล. จะถูกปิเปตลงในขวด แก้ว หรือหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีความจุ 60-80 มล. และแคลเซียมคาร์บอเนต 0.4 กรัม และเติมสารละลาย 5% 5 มล. ตามลำดับพร้อมเขย่าเบา ๆ เพื่อสร้าง pH ที่ต้องการและชี้แจงสารละลายตะกั่วอะซิเตตที่เตรียมในสารละลายกรดอะซิติก 5% การดำเนินการนี้ควรดำเนินการอย่างระมัดระวังเนื่องจากการเติมแคลเซียมคาร์บอเนตจะมาพร้อมกับการเกิดฟอง สารละลายจะถูกปั่นแยกอย่างรวดเร็วหรือกรองลงในขวดแห้งโดยใช้ตัวกรองแบบพับขนาดเล็กที่เตรียมไว้ล่วงหน้า
หากสารกรองกลายเป็นขุ่น การทำให้กระจ่างจะถูกทำซ้ำโดยใช้สารสกัดกรดอะซิติกอีกส่วนหนึ่งของผลิตภัณฑ์ที่วิเคราะห์ เติมแคลเซียมคาร์บอเนตเพิ่มขึ้น 2, 3 หรือ 4 เท่าและสารละลายตะกั่วอะซิเตต 5% จากนั้นกรองหรือปั่นแยกตามที่ระบุไว้ข้างต้น กระแสของไฮโดรเจนซัลไฟด์ที่ได้จากอุปกรณ์ Kipp โดยการกระทำของกรดไฮโดรคลอริกเจือจาง (1:1) หรือกรดซัลฟิวริก (1:3) บนเหล็กซัลไฟด์ จะถูกส่งผ่านตัวกรองโปร่งใสเป็นเวลา 5-15 นาที หากต้องการตกตะกอนตะกั่วซัลไฟด์อย่างรวดเร็วและสมบูรณ์ สารละลายจะถูกเขย่าอย่างแรงที่จุดเริ่มต้นของเส้นทางของไฮโดรเจนซัลไฟด์ การผ่านของไฮโดรเจนซัลไฟด์จะเสร็จสิ้นเมื่อชั้นของของเหลวเหนือตะกอนสีดำของลีดซัลไฟด์กลายเป็นสีโปร่งใส สารละลายจะถูกกรองผ่านตัวกรองไร้ขี้เถ้าแห้งขนาดเล็กลงในขวดแห้ง และไฮโดรเจนซัลไฟด์จะถูกกำจัดออกจากตัวกรองโปร่งใสอย่างสมบูรณ์โดยใช้กระแสคาร์บอนไดออกไซด์จากกระบอกสูบหรืออุปกรณ์ Kipp ที่อัดด้วยหินอ่อนและกรดไฮโดรคลอริกเจือจาง (1:1) คาร์บอนไดออกไซด์สามารถถูกแทนที่ด้วยไนโตรเจน การตรวจสอบความสมบูรณ์ของการกำจัดไฮโดรเจนซัลไฟด์นั้นดำเนินการโดยใช้กระดาษกรองที่ชุบสารละลายตะกั่วอะซิเตตซึ่งนำไปที่คอขวด ในกรณีที่ไม่มีไฮโดรเจนซัลไฟด์กระดาษจะยังคงไม่มีสีมีลักษณะเป็นสีเหลืองดำ จุดที่บ่งบอกว่ามีไฮโดรเจนซัลไฟด์อยู่ ควรดำเนินการผ่านของไฮโดรเจนซัลไฟด์และก๊าซเฉื่อยในตู้ดูดควัน
ขั้นแรก ปิเปต 5 มล. ของสารละลายกรดอะซิติก 80% และน้ำกลั่นเพียงพอในขวด เพื่อให้ปริมาตรรวมของของเหลวที่มีสารละลายทดสอบคือ 15 มล. จากนั้นปิเปตจาก 1 ถึง 10 มิลลิลิตรของสารละลายที่ทำให้กระจ่างในการทดสอบที่ได้รับหลังจากกำจัดไฮโดรเจนซัลไฟด์ออก และไตเตรท 0.001 N จากไมโครบิวเรตหรือไมโครปิเปต สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล จนเป็นสีชมพู ซึ่งไม่หายไปภายใน 30-60 วินาที การไทเทรตจะดำเนินการแบบหยดโดยเขย่าสารละลายไทเทรตอย่างต่อเนื่องเบาๆ การไตเตรทไม่ควรเกิน 2 นาที หลังจากเสร็จสิ้นการไตเตรทแล้วจำเป็นต้องเติมสารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol อีกสองหยดในขณะที่เขย่าสารละลายอย่างแรง หากสีของสารละลายทดสอบเข้มขึ้น เราสามารถสรุปได้ว่าพบจุดสิ้นสุดของปฏิกิริยาอย่างถูกต้อง และในกรณีนี้จะไม่คำนึงถึงปริมาตรของหยดตัวบ่งชี้ที่เพิ่มเข้าไปด้วย เมื่อกำหนดปริมาณสารละลายทดสอบที่จำเป็นสำหรับการไตเตรท ควรถือว่าไม่เกิน 2 มิลลิลิตรของ 0.001 N ที่ใช้ในการไตเตรท สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล
การตรวจวัดวิตามินซีจะดำเนินการอย่างน้อยสองครั้งและผลลัพธ์ของการไตเตรทแบบขนานไม่ควรแตกต่างกันมากกว่า 0.04 มล. ปริมาณวิตามินซีคำนวณเป็นค่าเฉลี่ยเลขคณิตของการหาค่าแบบขนาน 2-3 ครั้ง เมื่อคำนวณผลลัพธ์ของการไทเทรต ควรทำการแก้ไขสำหรับการกำหนดการควบคุม: การไทเทรต 0.001 n สารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol ส่วนผสมของกรดอะซิติก 80% 5 มล. และน้ำกลั่น 10 มล. จนกระทั่งเป็นสีชมพู การแก้ไขนี้มักจะเท่ากับ 0.06-0.08 มล. สำหรับปริมาตร 15 มล. จะถูกลบออกจาก จำนวนทั้งหมดตัวบ่งชี้ที่ใช้สำหรับการไตเตรทของสารละลายทดสอบ
โดยที่ V คือจำนวน 0.001 n สารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol ที่ ใช้สำหรับการไตเตรทโดยคำนึงถึงการแก้ไขสำหรับการไตเตรทควบคุม ml; K - ตัวประกอบการแปลงเป็น 0.001 n พอดี สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล; V1 คือปริมาตรที่นำตัวอย่างมาเมื่อเติมของเหลวสกัดลงไป ml; V2 คือปริมาตรของของเหลวที่วิเคราะห์เพื่อไตเตรท ml; V3 คือปริมาตรของสารละลายเริ่มต้นหรือสารสกัดที่นำมาวิเคราะห์หลังจากเติมลีดอะซิเตต, มล. V4 คือปริมาตรของสารละลายเริ่มต้นหรือสารสกัดที่นำมาวิเคราะห์ก่อนการบำบัดด้วยลีดอะซิเตต g—น้ำหนักของผลิตภัณฑ์, g; 0.088 - ปริมาณวิตามินซีที่สอดคล้องกับ 1 มล. คือ 0.001 n พอดี สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล
การทดสอบวิตามินซีไม่ควรทำในแสงแดดโดยตรง ระยะเวลาของการวิเคราะห์ไม่ควรเกิน 1 ชั่วโมง
การเตรียมการ 0.001 น. สารละลายตัวบ่งชี้ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล
เขย่าตัวบ่งชี้ 0.25-0.3 กรัมในขวดวัดปริมาตร 1 ลิตรกับน้ำกลั่น 600 มล. เป็นเวลา 1.5-2 ชั่วโมง (ปล่อยทิ้งไว้ให้ละลายข้ามคืน) เติมน้ำกลั่นเป็น 1 ลิตร ผสมให้เข้ากันแล้วกรอง โซลูชันตัวบ่งชี้เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ภายใน 5-10 วัน ควรเก็บไว้ในที่มืด ในที่เย็น โดยเฉพาะอย่างยิ่งในตู้เย็น
มีการตรวจสอบตัวบ่งชี้ titer ทุกวัน การปรากฏตัวของสีสกปรกเมื่อตรวจสอบเครื่องไตเตรทบ่งชี้ว่าโซลูชันตัวบ่งชี้ไม่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์
การหาค่าไทเทอร์ของสารละลายตัวบ่งชี้ - 2,6-dichlorophenolindophenol
การไตเตรทของสารละลายตัวบ่งชี้สามารถตั้งค่าได้สองวิธี
วิธีแรก.เติมสารละลายโซเดียมออกซาเลตอิ่มตัว 2.5 มิลลิลิตรและไทเทรตด้วย 0.01 N จากไมโครบิวเรตต์ลงในสารละลายตัวบ่งชี้ 5 มิลลิลิตร สารละลายเกลือของมอร์เตรียมที่ 0.02 N สารละลายกรดซัลฟูริกจนสีน้ำเงินหายไป และสีน้ำเงินแกมเขียวเปลี่ยนเป็นสีเหลืองอำพัน การไตเตรทของสารละลายเกลือของ Mohr ตั้งไว้ที่ 0.01 N สารละลายโพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนตและไทเทอร์ของอย่างหลังคือ 0.01 N สารละลายโซเดียมออกซาเลตหรือกรดออกซาลิกตามวิธีที่เป็นที่ยอมรับโดยทั่วไป
สารละลายเกลือของ Mohr ยังคงเหมาะสำหรับการวิเคราะห์เป็นเวลา 2-3 เดือนเมื่อเก็บไว้ในที่เย็นและมืด มีการตรวจสอบไทเทอร์ของสารละลายเกลือของ Mohr อย่างน้อยเดือนละครั้ง
วิธีที่สอง.ผลึกกรดแอสคอร์บิกหลายผลึก (ประมาณ 1-1.5 มก.) ละลายในสารละลายกรดซัลฟิวริก 2% 50 มล. สารละลายนี้ 5 มิลลิลิตรที่ถ่ายด้วยปิเปตจะถูกไตเตรทด้วยสารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอลจากไมโครบิวเรตจนกระทั่งเป็นสีชมพูปรากฏขึ้น ซึ่งจะไม่หายไปภายใน 3 นาที ในเวลาเดียวกัน สารละลายกรดแอสคอร์บิกในปริมาณเท่ากัน (5 มล.) จะถูกไตเตรตจากไมโครบิวเรตอื่นเป็น 0.001 N พอดี สารละลายของกรดโพแทสเซียมไอโอดิก (0.3568 กรัมของ KJO3 แห้งเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 105 ° C ละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตรผลลัพธ์ 0.01 N ของสารละลาย KJO3 ที่ได้จะถูกเจือจาง 10 ครั้งในขวดปริมาตรที่มีน้ำกลั่นก่อนการวิเคราะห์ ). การไตเตรทจะดำเนินการต่อหน้าโพแทสเซียมไอโอไดด์หลายผลึก (1-2 มก.) และสารละลายแป้ง 1% 2-3 หยดจนกระทั่งเป็นสีน้ำเงิน การไทเทรตนี้สามารถดำเนินการได้อย่างสะดวกในถ้วยพอร์ซเลน
ค่าไทเทอร์ของสารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล (x) เทียบกับกรดแอสคอร์บิกคำนวณโดยใช้สูตร
โดยที่ V คือจำนวน 0.001 n สารละลาย KJO3 ใช้สำหรับการไตเตรทสารละลายกรดแอสคอร์บิก มล. V1 คือปริมาณของสารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอลที่ใช้สำหรับการไตเตรทสารละลายกรดแอสคอร์บิก, มล.; 0.088 - ปริมาณวิตามินซีที่สอดคล้องกับ 1 มล. คือ 0.001 n พอดี สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล, มก.
ควบคุมวิธีการตรวจวิตามินซีแบบง่าย
วิธีการนี้ใช้สำหรับการวิเคราะห์มวลของผักและผลไม้สด ช่วยให้สามารถตรวจวัดกรดแอสคอร์บิกได้ในรูปแบบรีดิวซ์เท่านั้น ความแม่นยำของวิธีการคือ ±20%
วิธีการกำหนดขึ้นอยู่กับปริมาณวิตามินซีที่คาดหวังในผลิตภัณฑ์ นำตัวอย่าง 10-30 กรัมลงในแก้วที่ชั่งน้ำหนักแล้วเทสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 4% 50 มล. ลงไปอย่างรวดเร็ว ตัวอย่างที่เติมกรดสามารถเก็บไว้ได้ 10-15 นาที ตัวอย่างพร้อมกับกรดจะถูกถ่ายโอนไปยังปูนพอร์ซเลน กรดบางส่วนจากปูนถูกเทลงในขวดปริมาตรหรือกระบอกสูบขนาด 100 มล. และตัวอย่างที่มีกรดเหลืออยู่เล็กน้อยจะถูกบดให้ละเอียด จากนั้นเนื้อหาของปูนจะถูกถ่ายโอนไปยังกระบอกสูบเดียวกัน (หรือขวด) ซึ่งมีกรดไฮโดรคลอริกส่วนที่เหลืออยู่ เพื่อล้างสารตกค้างจากปูนพอร์ซเลนด้วยน้ำกลั่นลงในขวดวัดปริมาตร (หรือกระบอกสูบเดียวกัน) สารละลายในขวดวัดปริมาตรจะถูกนำไปทำเครื่องหมายด้วยน้ำกลั่น เนื้อหาของขวดผสมให้เข้ากันและกรองผ่านผ้ากอซหรือน้ำอย่างรวดเร็ว ตัวอย่างที่นำมาจากโซลูชันนี้เพื่อการไทเทรต
ในกรณีของผลิตภัณฑ์ที่บดยาก ให้เติมทรายควอทซ์หรือผงแก้วที่ชั่งน้ำหนัก ล้างอย่างดี และเผาแล้ว 2-5 กรัมลงในตัวอย่างในครกพอร์ซเลน หลังจากที่เนื้อหาทั้งหมดของปูนถูกถ่ายโอนไปยังขวดวัดปริมาตร (หรือทรงกระบอก) และปริมาตรของสารสกัดถูกทำให้เป็น 100 มล. แล้ว น้ำกลั่นจะถูกเติมลงในสารสกัดในปริมาณ 0.35 มล. สำหรับทรายแต่ละกรัมที่นำมา และ ของเหลวทั้งหมดผสมให้เข้ากันอีกครั้ง
เมื่อตรวจสอบวัสดุที่เป็นของเหลว จะเจือจางในกระบอกสูบด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 4% และน้ำกลั่น เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายของกรดไฮโดรคลอริกอยู่ที่ 2% กรดไฮโดรคลอริกสามารถถูกแทนที่ด้วยกรดเมตาฟอสฟอริกหรือออกซาลิก เพื่อให้ได้สารสกัดให้ใช้สารละลาย 2% ของกรดเมตาฟอสฟอริกที่เตรียมใน 2 N สารละลายกรดซัลฟิวริก ขั้นแรก เตรียมสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริก 20% ใน 2 N สารละลายกรดซัลฟิวริกและก่อนใช้งานสารละลายนี้จะเจือจาง 10 เท่าด้วย 2 N สารละลายกรดซัลฟิวริก
ตัวอย่างของผลิตภัณฑ์ทดสอบบดในปูนด้วยสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริก 2% (ตัวอย่างจะต้องเคลือบด้วยกรด) จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังกระบอกสูบตวง ล้างปูนหลายครั้งด้วยสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริกจำนวนเล็กน้อย สารละลายเหล่านี้จะถูกเทลงในกระบอกสูบโดยนำเนื้อหามาอยู่ที่ 100 มล. วิตามินซีในสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริกมีความคงตัวเป็นเวลาหลายชั่วโมง ในกรณีที่ไม่มีกรดเมตาฟอสฟอริก สามารถใช้กรดออกซาลิกได้ ตัวอย่างของวัสดุทดสอบจะถูกบดอย่างรวดเร็วในมอร์ตาร์โดยใช้สารละลายกรดไฮโดรคลอริก 1% ปริมาณ 20 มล. จากนั้นปริมาณของปูนขาวจะถูกถ่ายโอนไปยังกระบอกตวงที่มีความจุ 100 มล. และปริมาตรของสารสกัดคือ ปรับเป็น 100 มล. โดยใช้สารละลาย 1% กรดออกซาลิก. หลังจากกวนแล้วสารสกัดจะถูกกรอง สำหรับการไทเทรต 0.001 N ด้วยสารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol จะดึงสารสกัดที่กรองแล้วไม่เกิน 5 มล.
การไตเตรทและการคำนวณปริมาณวิตามินซี (เป็นมิลลิกรัมต่อผลิตภัณฑ์ 100 กรัม) ดำเนินการในลักษณะเดียวกับวิธีการอนุญาโตตุลาการ ความคลาดเคลื่อนระหว่างผลการวิเคราะห์ของตัวอย่างคู่ขนานสองตัวอย่างจากผลิตภัณฑ์เดียวกันไม่ควรเกิน 3-4%
วิธีการตรวจวัดวิตามินซีในอาหารแห้งที่มีซัลเฟต
วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับข้อเท็จจริงที่ว่าสารประกอบซัลเฟอร์ (ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด) ถูกบล็อกโดยฟอร์มาลดีไฮด์และไม่รบกวนการไตเตรทของกรดแอสคอร์บิก
ส่วนที่ชั่งน้ำหนักของผลิตภัณฑ์แห้งซึ่งนำมาในลักษณะที่สารสกัดมีวิตามินซี 0.04-0.1 มก. บดในครกด้วยสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริก 5% สารสกัดจะถูกกรอง และในกรณีศึกษาผลิตภัณฑ์ที่ไม่มีซัลเฟต ให้ไตเตรทเป็น 0.001 N สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล
เมื่อวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์แห้งที่มีซัลเฟต สารสกัดเมตาฟอสฟอริกที่ได้จะถูกทำให้เป็นกรดด้วยสารละลายกรดซัลฟิวริก 50% และบำบัดด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ ซึ่งความเข้มข้นในสารละลายสุดท้ายควรเป็น 4% ปล่อยให้สารละลายยืนเป็นเวลา 8 นาที จากนั้นไตเตรทด้วย 0.001 N สารละลาย 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอลตามข้างต้น
ความมุ่งมั่นของแคโรทีน
วิธีการตรวจวัดแคโรทีนนั้นขึ้นอยู่กับการสกัดจากเนื้อเยื่อพืชด้วยน้ำมันเบนซินหรือปิโตรเลียมอีเทอร์ จากนั้นจึงปล่อยสารแคโรทีนออกมาโดยใช้วิธีโครมาโตกราฟีแบบดูดซับ การหาปริมาณแคโรทีนเชิงปริมาณนั้นดำเนินการโดยการวัดสีของสารละลายผลลัพธ์ที่มีแคโรทีน มีการเสนอวิธีการสามแบบเพื่อตรวจวัดแคโรทีน
วิธีการกำหนด ตัวเลือกแรกแคโรทีนถูกสกัดจากวัสดุพืชหลังจากทำให้แห้งด้วยแอลกอฮอล์หรืออะซิโตน จากนั้นสารที่กลายเป็นสารสกัดจะถูกซาโปนิไฟด์ด้วยสารละลายอัลคาไลแอลกอฮอล์ แคโรทีนจะถูกสกัดอีกครั้ง สารกรองจะถูกส่งผ่านคอลัมน์ดูดซับ จากนั้นจึงกำหนดความเข้มของสีของสารกรอง
ตัวอย่างของผลิตภัณฑ์บดจะถูกนำมาในปริมาณตั้งแต่ 1 ถึง 50 กรัมขึ้นอยู่กับปริมาณแคโรทีนและบดในปูนพอร์ซเลนด้วยทรายที่ล้างและเผาหรือแก้วบดเล็กน้อย เพิ่มแอลกอฮอล์หรืออะซิโตนห้าเท่าลงในมวลดินในครกบดแล้วเติมน้ำมันเบนซินหรือปิโตรเลียมอีเทอร์ 20-30 มล. ในส่วนต่างๆ ส่วนผสมบดแล้วสารสกัดจะถูกกรองผ่านตัวกรองกระดาษ การสกัดซ้ำจนกระทั่งส่วนสุดท้ายของสารสกัดไม่มีสี
สารกรองจะถูกถ่ายโอนไปยังช่องทางแยก โดยเติมน้ำกลั่นสองสามมิลลิลิตรเพื่อแยกชั้น: ชั้นบนเป็นน้ำมันเบนซิน ชั้นล่างคือแอลกอฮอล์หรืออะซิโตน ชั้นแอลกอฮอล์หรืออะซิโตนถูกเทลงในช่องทางแยกอีกช่องหนึ่งแล้วล้างด้วยน้ำมันเบนซินหรือปิโตรเลียมอีเทอร์ 2 ครั้ง โดยเติมสารสกัดเหล่านี้ลงในตัวกรองหลัก สารสกัดที่รวมกันจะถูกถ่ายโอนลงในขวดและทำให้เข้มข้นในปริมาตร 20-30 มล. ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิไม่เกิน 50 ° C ในสุญญากาศ เติมอัลคาไลแอลกอฮอล์ 5% ในปริมาตรที่เท่ากันโดยประมาณลงในสารสกัดและซาโปนิไฟด์เป็นเวลา 30 นาที-1 ชั่วโมงในอ่างน้ำที่มีกรดไหลย้อนในขณะที่สารละลายกำลังเดือด สารละลายซาโปนิไฟด์จะถูกถ่ายโอนไปยังช่องทางแยก เติมน้ำสองสามมิลลิลิตร เขย่า และแยกชั้นน้ำมันเบนซิน ซึ่งล้างแล้ว 8-10 ครั้งด้วยน้ำกลั่น สารสกัดน้ำมันเบนซินจะถูกถ่ายโอนลงในขวดและทำให้แห้งด้วยโซเดียมซัลเฟตปราศจากน้ำขณะเขย่าจนกระทั่งความขุ่นของสารละลายหายไปจากนั้นจึงกรองและทำให้เข้มข้นจนถึงปริมาตร 5-10 มล. ตามที่ระบุไว้ข้างต้น สารสกัดที่ควบแน่นจะถูกส่งผ่านที่ความดันต่ำผ่านคอลัมน์ดูดซับที่เต็มไปด้วยแมกนีเซียมออกไซด์หรืออลูมิเนียมออกไซด์ แคโรทีนที่ถูกดูดซับในคอลัมน์จะถูกชะ (ละลาย) ด้วยอีเทอร์หรือน้ำมันเบนซิน แล้วส่งผ่านตัวดูดซับจนกระทั่งของเหลวที่ออกมาจากคอลัมน์ไม่มีสี
ผลการกรองที่ได้จะถูกรวบรวมในขวดวัดปริมาตร ปริมาตรของของเหลวจะถูกปรับตามเครื่องหมายด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์หรือน้ำมันเบนซิน และกำหนดด้วยคัลเลอริมิเตอร์ในคัลเลอริมิเตอร์ดูบอสก์หรือบนโฟโตอิเล็กโตรคัลเลอร์มิเตอร์ โดยใช้สารละลายมาตรฐานของอะโซเบนซีนหรือโพแทสเซียม ไดโครเมตสำหรับการเปรียบเทียบ
ตัวเลือกที่สองขั้นแรก ดำเนินการซาพอนิฟิเคชันของสารทดสอบ จากนั้นทำการสกัดแคโรทีน การดูดซับ และการวัดสี ส่วนที่ชั่งน้ำหนักของสารบด (ตั้งแต่ 1 ถึง 50 กรัม) บดในปูนแล้วถูกถ่ายโอนไปยังขวด จากนั้นเติมอัลคาไลแอลกอฮอล์ 5% 20-40 มล. เติมซาพอนิฟายด์เป็นเวลา 30 นาที-1 ชั่วโมง จากนั้นดำเนินการต่อใน แบบเดียวกับวิธีแรก
ตัวเลือกที่สาม (ประยุกต์)ด้วยวิธีนี้ ซาพอนิฟิเคชันจะถูกกำจัดออกไป และขั้นตอนอื่นๆ ของการวิเคราะห์จะเหมือนกับวิธีแรก
สารสกัดที่ได้จะถูกล้างด้วยน้ำ เช็ดให้แห้งบนแอนไฮดรัส โซเดียม ซัลเฟต ทำให้เข้มข้นในปริมาณเล็กน้อย ผ่านคอลัมน์ที่มีตัวดูดซับและเครื่องวัดสี
เมื่อพิจารณาหาแคโรทีนในแครอท การใช้คอลัมน์การดูดซับสามารถแยกออกได้ เนื่องจากแครอทมีแคโรทีนอยด์อื่น ๆ จำนวนเล็กน้อย ซึ่งแทบไม่มีผลในทางปฏิบัติต่อผลการพิจารณา การวิเคราะห์ตามตัวเลือกที่สามจะดำเนินการในกรณีที่ผลลัพธ์ของการพิจารณาแคโรทีนตรงกับผลลัพธ์ที่ได้รับเมื่อทำงานตามตัวเลือกแรก การหาปริมาณแคโรทีนในวัสดุพืชแห้ง (ผัก ผลไม้ เบอร์รี่ และผลิตภัณฑ์อื่นๆ) ตัวอย่างของสารบดนั้นนำมาจาก 2 ถึง 10 กรัมแคโรทีนสกัดด้วยน้ำมันเบนซินหรือปิโตรเลียมอีเทอร์โดยไม่ต้องบำบัดด้วยแอลกอฮอล์ล่วงหน้า สารสกัดที่ได้จะมีความเข้มข้นถึงปริมาตร 20-30 มล. และซาโปนิไฟด์ด้วยสารละลายแอลกอฮอล์ของ KOH ถัดไป การวิเคราะห์จะดำเนินการตามที่ระบุไว้ในตัวเลือกแรก
การคำนวณปริมาณแคโรทีนเมื่อใช้คัลเลอริมิเตอร์ Duboscq และสารละลายมาตรฐานของอะโซเบนซีนหรือโพแทสเซียมไบโครเมตสำหรับการวัดสี ปริมาณแคโรทีน (x) ในหน่วย mg% ในผลิตภัณฑ์ทดสอบจะคำนวณโดยใช้สูตร
โดยที่ K คือปัจจัยการแปลง (ปริมาณแคโรทีนในหน่วยมิลลิกรัมซึ่งสอดคล้องกับสารละลายมาตรฐานของอะโซเบนซีน 1 มิลลิลิตรคือ 0.00235 หรือสารละลายมาตรฐานของโพแทสเซียมไดโครเมตคือ 0.00208) H - การอ่านมาตราส่วนโซลูชันมาตรฐาน mm; H1 - การอ่านสเกลของสารละลายทดสอบ mm; g - ส่วนที่ชั่งน้ำหนักของผลิตภัณฑ์ภายใต้การศึกษา g; V คือปริมาตรของการกรองหลังจากการดูดซับด้วยโครมาโตกราฟี, มล.
เมื่อใช้เครื่องวัดสีด้วยไฟฟ้า ให้ใช้สูตรต่อไปนี้:
โดยที่ H2 คือการอ่านค่าสเกลเรโอคอร์ดสำหรับสารละลายมาตรฐาน H1 - เหมือนกันสำหรับโซลูชันการทดสอบ สัญกรณ์ที่เหลือจะเหมือนกับในสูตรก่อนหน้า
การเตรียมสารละลายมาตรฐาน
สารละลายอะโซเบนซีน อะโซเบนซีนบริสุทธิ์ทางเคมีแบบผลึก 14.5 มก. ละลายในเอทิลแอลกอฮอล์ 96% 100 มล.
สารละลายโพแทสเซียมไบโครเมต โพแทสเซียมไบโครเมตตกผลึกซ้ำสามครั้ง 360 มก. ละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร
การเตรียมคอลัมน์การดูดซับ
สำหรับคอลัมน์ดูดซับจะใช้หลอดแก้วยาว 12-15 ซม. เส้นผ่านศูนย์กลาง 1-1.5 ซม. โดยแคบลง ท่อถูกสอดผ่านตัวกั้นเข้าไปในขวดแผดเผา ใน ส่วนล่างวางสำลีไว้ในท่อดูดซับจากนั้นตัวดูดซับคือแมกนีเซียมออกไซด์หรืออลูมิเนียมออกไซด์ ในการทำเช่นนี้ให้เตรียมสารละลายจากตัวดูดซับและน้ำมันเบนซินหรือปิโตรเลียมอีเทอร์ คอลัมน์เต็มไปด้วยข้าวต้ม 4-6 ซม. และล้างด้วยตัวทำละลายส่วนเล็ก ๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดฟองอากาศ
ความมุ่งมั่นของวิตามินบี 1
วิตามินบี 1 (ไทอามีน, อะนูริน) พบได้ในผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติทั้งในรูปแบบอิสระและแบบผูกมัด ในกรณีแรกคือไทอามีนอิสระหรือคลอไรด์ - ไฮโดรคลอไรด์ (C12H18O4Cl2) ในสถานะที่ถูกผูกไว้คือเอสเทอร์ไทอามีนไพโรฟอสเฟตรวมกับตัวพาโปรตีนเช่น คือโคเอ็นไซม์คาร์บอกซิเลส วิธีการตรวจสอบวิตามินบี 1 ขึ้นอยู่กับความสามารถของไทอามีนในการออกซิไดซ์เป็นไทโอโครมโดยโพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์ในตัวกลางที่เป็นด่างและคุณสมบัติของไทโอโครมที่เกิดขึ้นในการสร้างแสงเรืองแสงสีน้ำเงินเมื่อถูกส่องสว่างด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต ในระหว่างการวิเคราะห์ ไธโอโครมจะถูกสกัดจากสารละลายในน้ำ-ด่างที่มีไอโซบิวทิล บิวทิล หรือไอโซเอมิลแอลกอฮอล์ เพื่อแยกไทโอโครมออกจากฟลูออเรสเซนต์และสารเจือปนที่ไม่พึงประสงค์อื่นๆ ที่ไม่ละลายในแอลกอฮอล์เหล่านี้
ปริมาณไทอามีนในสารทดสอบถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ของการทดสอบกับสารละลายมาตรฐานบนฟลูออโรมิเตอร์ วิธีการที่อธิบายไว้นี้ใช้ไม่เพียงแต่ตรวจวัดปริมาณไทอามีนอิสระเท่านั้น แต่ยังรวมถึงปริมาณไทอามีนทั้งหมดด้วย ในกรณีนี้ไทอามีนในรูปแบบที่ถูกผูกไว้จะถูกทำให้แตกแยกก่อนด้วยการเตรียมเอนไซม์ที่มีฟอสฟาเตส
วิธีฟลูออโรเมตริกเพื่อกำหนดวิตามินบี 1ตัวอย่างผลิตภัณฑ์ภายใต้การศึกษาจำนวน 5-10 กรัมวางในครกบดให้ละเอียดด้วย 0.1 N. 10-25 มล. สารละลายกรดซัลฟิวริกและถ่ายโอนเชิงปริมาณไปยังขวดโดยใช้สารละลายกรดเดียวกัน ปริมาตรรวมของของเหลวในขวดจะถูกปรับเป็นประมาณ 75 มล. ขวดถูกปิดด้วยคอนเดนเซอร์ไหลย้อน (อากาศ) และจุ่มลงในน้ำเดือด อ่างอาบน้ำและเป็นเวลา 45 นาทีโดยมีการกวนเนื้อหาเป็นระยะ ๆ เพื่อสกัดไทอามีน ในกรณีของการพิจารณาไทอามีนอิสระ สารสกัดที่ได้จะถูกทำให้เย็นลง โดยเติมสารละลายโซเดียมอะซิเตต 2.5 โมลาร์ลงใน pH 5.0 ปรับปริมาตรเป็น 100 มล. ด้วยน้ำกลั่น ผสม กรอง และสารละลาย 10-20 มล. จะถูกนำไปวิเคราะห์ต่อไป
เมื่อพิจารณาปริมาณไทอามีนทั้งหมดสารสกัดจะถูกทำให้เย็นลงที่ 35-40 ° C และเติมการเตรียมเอนไซม์ลงไปซึ่งในปริมาณ 0.03 กรัมต่อวัตถุแห้ง 1 กรัมของตัวอย่างจะถูกบดล่วงหน้าในปูนด้วย สารละลายโซเดียมอะซิเตต 2.5 โมลาร์ 2-3 มิลลิลิตร จากนั้นสารแขวนลอยที่เกิดขึ้นของยาจะถูกถ่ายโอนลงในขวดโดยใช้สารละลายโซเดียมอะซิเตต 2-3 มิลลิลิตร และด้วยสารละลายเดียวกัน ค่า pH ของสารสกัดจะถูกปรับเป็น 5.0
หลังจากเพิ่มการเตรียมเอนไซม์แล้วขวดที่มีสารสกัดจะถูกปิดด้วยปลั๊กสำลีและวางไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 12-15 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C จากนั้นเนื้อหาของขวดจะถูกทำให้เย็นลงปริมาตรจะถูกปรับเป็น 100 มล. กับน้ำกลั่น ผสมและกรอง การกำหนดไทอามีนอิสระเพิ่มเติมและเนื้อหาทั้งหมดจะดำเนินการในลักษณะเดียวกัน
สารกรอง 10-20 มิลลิลิตรจะถูกส่งผ่านคอลัมน์ดูดซับเพื่อดูดซับไทอามีน เพื่อจุดประสงค์นี้จะใช้หลอดแก้ว (รูปที่ 25) โดยมีขนาดดังต่อไปนี้: ในส่วนบน - เส้นผ่านศูนย์กลาง 25 มม. และความยาว 90 มม. ในส่วนตรงกลาง - เส้นผ่านศูนย์กลาง 7 มม. และความยาว 150 มม. และในส่วนล่าง - เส้นผ่านศูนย์กลาง 5 มม. (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 0.03-1.0 มม.) และความยาว 30 มม. ใยแก้ววางอยู่ตรงกลางของหลอดและเทสารดูดซับไว้ด้านบน สำหรับเครื่องแลกเปลี่ยนไอออนบวก ODV-3 ความสูงของคอลัมน์ควรอยู่ที่ประมาณ 8 ซม. คอลัมน์ที่เตรียมไว้สำหรับการใช้งานจะติดตั้งอยู่บนตัวหยุดในกระบอกตวงที่มีความจุ 100 มล. ตัวดูดซับจะถูกล้างด้วยสารละลายกรดอะซิติก 3% 10 มล. และสารละลายทดสอบจะถูกส่งผ่านคอลัมน์ จากนั้นตัวดูดซับจะถูกล้าง 3 ครั้งด้วยน้ำกลั่น 10 มล. และไทอามีนจะถูกชะออกจากตัวดูดซับด้วยสารละลายโพแทสเซียมคลอไรด์ 25% ใน 0.1 N ให้ความร้อนจนเดือด สารละลายกรดไฮโดรคลอริกในส่วน 6-7 มล. สารชะจะถูกรวบรวมในกระบอกตวงที่สะอาดจนมีปริมาตร 30 มล.
สารละลายที่ได้ 5 มิลลิลิตรจะถูกปิเปตลงในช่องทางแยกขนาดเล็กสองช่อง เติมส่วนผสมสำหรับออกซิเดชันไทอามีน 3 มล. (สารละลายโพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์ 0.4% ในสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 15%) ลงในช่องทางแรก ผสมแล้วเติมแอลกอฮอล์ไอโซบิวทิล (บิวทิลหรือไอโซamyl) 12 มล. เพื่อแยกไทโอโครมที่เกิดขึ้น เติมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 15% 3 มล. ลงในช่องทางที่สอง (ตัวอย่างควบคุม) ผสมและเติมไอโซบิวทิลแอลกอฮอล์ 12 มล. เขย่ากรวยทั้งสองเป็นเวลา 2 นาที ส่วนผสมถูกปล่อยทิ้งไว้จนกว่าจะแยกออกโดยสมบูรณ์ ชั้นน้ำ-ด่างด้านล่างจะถูกแยกออก และชั้นแอลกอฮอล์จะถูกกรองผ่านตัวกรองกระดาษ โดยใส่แอนไฮดรัส โซเดียม ซัลเฟต 2-3 กรัมก่อน ; สารกรองใสจะถูกรวบรวมไว้ในหลอดทดลองแบบแห้ง จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังคิวเวตต์ฟลูออโรมิเตอร์ สารละลายแอลกอฮอล์ยังสามารถทำให้แห้งด้วยโซเดียมซัลเฟตได้โดยตรงในกรวยแยก หลังจากเติมรีเอเจนต์ประมาณ 2 กรัม ส่วนผสมจะถูกเขย่าและกรองสารละลายที่ขาดน้ำผ่านตัวกรองกระดาษลงในหลอดทดลองที่แห้ง
เตรียมสารละลายไทโอโครมจากสารละลายไทอามีนมาตรฐานดังนี้ เติมสารละลาย 1 มิลลิลิตรที่มีไทอามีน 1 ไมโครกรัมลงในช่องทางแยกสองช่องด้วยปิเปตตวง เติมสารละลายโพแทสเซียมคลอไรด์ 25% 4 มิลลิลิตร จากนั้นเติม 3 มล. ของส่วนผสมสำหรับออกซิเดชั่นในช่องทางเดียว และในวินาที (ตัวอย่างควบคุม) - สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 15% 3 มล. เนื้อหาของกรวยผสมกันและเติมไอโซบิวทิลแอลกอฮอล์ 12 มล. ลงในแต่ละกรวย จากนั้นดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ของสารละลายแอลกอฮอล์ที่เตรียมไว้ถูกกำหนดบนฟลูออโรมิเตอร์ (รูปที่ 26) พร้อมฟิลเตอร์แสงพิเศษโดยใช้กัลวาโนมิเตอร์ที่มีความละเอียดอ่อน ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์วัดได้ในสารละลาย 4 แบบ: ในสารละลายทดสอบ 2 แบบ (การควบคุมแบบออกซิไดซ์และแบบไม่ออกซิไดซ์) และในสารละลายมาตรฐาน 2 แบบ (การควบคุมแบบออกซิไดซ์และแบบไม่ออกซิไดซ์) เติมสารละลายไอโซบิวทิลประมาณ 8 มล. ในแต่ละคิวเวท
โดยที่ A คือการอ่านค่าฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายออกซิไดซ์ที่ทดสอบ B - การอ่านค่าฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายที่ไม่ออกซิไดซ์ที่ทดสอบแล้ว A1 - การอ่านค่าฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายออกซิไดซ์มาตรฐาน B1 - การอ่านค่าฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายมาตรฐานที่ไม่ออกซิไดซ์ g - ส่วนที่ชั่งน้ำหนักของผลิตภัณฑ์ภายใต้การศึกษา g; V1 - ปริมาตรรวมของสารสกัด, มล.; V2 คือปริมาตรของสารสกัดที่ใช้ในการดูดซับ ml; V3 - ปริมาตรรวมของสารชะล้าง, มล.; V4 - ปริมาตรของสารชะสำหรับออกซิเดชัน, มล.; 1,000 - ปัจจัยการแปลง มก.
การเตรียมรีเอเจนต์และการเตรียมพื้นฐาน
1. สารละลายไทอามีนมาตรฐาน ไทอามีนคลอไรด์ผลึก 10 มก. ละลายใน 0.001 N 25% สารละลายแอลกอฮอล์กรดไฮโดรคลอริกในขวดปริมาตร 100 มล. สารละลายไม่เปลี่ยนแปลงเป็นเวลา 1-1.5 เดือนเมื่อเก็บในขวดสีเข้มในที่เย็น ในการเตรียมสารละลายสำหรับการทำงาน ให้เติมสารละลายมาตรฐาน 1 มล. ลงในขวดขนาด 100 มล. แล้วเจือจางด้วยน้ำกลั่นจนถึงเครื่องหมาย เตรียมสารละลายก่อนการวิเคราะห์ โดยมีไทอามีน 1 ไมโครกรัมใน 1 มล.
2. สารละลายโซเดียมอะซิเตต 2.5 โมล โซเดียมอะซิเตต 340 กรัมละลายในน้ำกลั่นและปรับปริมาตรเป็น 1 ลิตร
3. สารละลายโพแทสเซียมคลอไรด์ 25% โพแทสเซียมคลอไรด์ 250 กรัมละลายในน้ำกลั่น เติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 8.5 มล. และปรับปริมาตรเป็น 1 ลิตรด้วยน้ำ
4. ส่วนผสมสำหรับการเกิดออกซิเดชัน - สารละลายโพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์ 0.04% ในสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 15% ส่วนผสมถูกเตรียมก่อนการวิเคราะห์โดยการผสมสารละลายโพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์ 1% ที่เตรียมสดใหม่ 4 มล. กับสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 15% 96 มล.
5. การเตรียมเอนไซม์จาก Penicillium notatum หรือ Aspergillus oryza
6. ตัวแลกเปลี่ยนไอออนบวกตัวดูดซับ SDV-3 เครื่องแลกเปลี่ยนไอออนบวกถูกบดให้มีขนาดอนุภาค 0.5 ถึง 0.13 มม. ในปริมาณ 70% และน้อยกว่า 0.13 มม. - 30% หากต้องการขจัดสิ่งสกปรกที่เป็นเหล็ก ให้ผสมกรดไฮโดรคลอริก 10% สามครั้ง ครั้งละ 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 40-60°C แล้วล้างด้วยน้ำกลั่นจนปฏิกิริยากับคลอรีนหายไปและกระตุ้นด้วยการทำให้แห้งที่อุณหภูมิไม่เกิน 60-70°C .
ความมุ่งมั่นของวิตามินบี 2
วิตามินบี 2 (ไรโบฟลาวิน) C17H20N4O6 พบได้ในอาหารธรรมชาติทั้งในสภาวะอิสระและในสภาวะที่ถูกผูกไว้ ไรโบฟลาวินที่ถูกผูกไว้สามรูปแบบเป็นที่รู้จักกัน: ฟลาวินโมโนนิวคลีโอไทด์, ฟลาวินอะดีนีนไดนิวคลีโอไทด์ และรูปแบบที่สามผูกพันกับโปรตีนอย่างแน่นหนา
วิธีการตรวจวิตามินบี 2 ขึ้นอยู่กับคุณสมบัติ สารละลายที่เป็นน้ำไรโบฟลาวินให้แสงเรืองแสงสีเหลืองเขียวที่รุนแรงภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต เมื่อพิจารณาปริมาณวิตามินบี 2 ทั้งหมดโดยใช้วิธีฟลูออโรเมตริกคือไรโบฟลาวิน แบบฟอร์มที่เกี่ยวข้องถ่ายโอนไปยังสถานะอิสระโดยเอนไซม์และไฮโดรไลซิสของกรด ในระหว่างการวิเคราะห์ สารสกัดจากผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติจะได้รับการบำบัดตามลำดับด้วยเปอร์แมงกาเนตและโซเดียมไฮโดรซัลไฟต์ เพื่อลดปริมาณสิ่งเจือปนจากฟลูออเรสเซนต์ จากนั้น ในตัวอย่างที่แยกจากกัน ความเข้มข้นของสารเรืองแสงที่ไม่จำเพาะจะถูกกำหนด ซึ่งขึ้นอยู่กับสิ่งเจือปนที่เหลืออยู่เท่านั้น ในตัวอย่างนี้ ไรโบฟลาวินจะถูกรีดิวซ์ให้กลายเป็นลิวโกที่ไม่มีสีในขั้นแรก และจึง "ดับ" การเรืองแสงของมัน เมื่อคำนวณปริมาณวิตามินบี 2 ในผลิตภัณฑ์ภายใต้การศึกษา ข้อมูลของการเรืองแสงที่ไม่จำเพาะจะถูกป้อนเพื่อแก้ไขผลลัพธ์ของการพิจารณาการเรืองแสงทั่วไป
การกำหนดปริมาณวิตามินบี 2 ทั้งหมดตัวอย่างผลิตภัณฑ์ (5-10 กรัม) บดให้ละเอียดในมอร์ตาร์ด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟตจำนวนเล็กน้อย (pH 7.8-8.0) จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังขวดทดลองโดยใช้สารละลายบัฟเฟอร์เดียวกัน ทำให้การเจือจางทั้งหมดมีอัตราส่วน ของ 1:15 หรือ 1:20. ขวดที่มีเนื้อหาจะถูกให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 45 นาทีโดยคนบ่อยๆ ทำให้เย็นลงที่ 30 ° C ค่า pH จะถูกตรวจสอบ และในกรณีที่มีการเปลี่ยนแปลงไปยังโซนที่เป็นกรด pH จะถูกปรับอีกครั้งเป็น 7.8- 8.0 โดยเติมบัฟเฟอร์ฟอสเฟต การเตรียมเอนไซม์ (ทริปซิน, แพนครีเอตินหรือการเตรียมจากเพนิซิลเลียม notatum) จะถูกเติมลงในสารสกัดในปริมาณ 30 มก. ต่อวัตถุแห้ง 1 กรัมของตัวอย่างซึ่งบดไว้ล่วงหน้าในปูนด้วยฟอสเฟต 2-3 มล. บัฟเฟอร์หรือโซเดียมอะซิเตท เครื่องดูดควันจะถูกเก็บไว้ในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37° C เป็นเวลา 12-20 ชั่วโมง ในระหว่างการไฮโดรไลซิสของเอนไซม์ รูปแบบของไรโบฟลาวินที่จับกับโปรตีนอย่างแน่นหนาจะถูกแยกออก หลังจากเย็นลงแล้ว สารสกัดจะถูกทำให้มีปริมาตรเท่ากับการเจือจางรวม 1:25 หรือ 1:30 ด้วยน้ำกลั่น และกรองผ่านตัวกรองแบบจีบ
เติมสารกรอง 5 มล. ลงในขวดเล็ก เติมกรดไตรคลอโรอะซิติก 20% 5 มล. และให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 10 นาที สารละลายถูกทำให้เย็นลง และเติมสารละลายไดโพแทสเซียมฟอสเฟตขนาด 4 โมลาร์ 1/4 ปริมาตรเพื่อปรับ pH เป็น 6.0 จากนั้นจึงเติมสารละลายเปอร์แมงกาเนต 4% ลงในสารสกัดเพื่อออกซิไดซ์สิ่งเจือปนจากฟลูออเรสเซนต์ โดยปกติสารละลายเปอร์แมงกาเนตจะถูกเติมในปริมาณ 0.2-0.4 มล. จนกระทั่งสารสกัดปรากฏเป็นสีแดงถาวร
สารสกัดที่บำบัดด้วยเปอร์แมงกาเนตจะถูกปล่อยทิ้งไว้ตามลำพังเป็นเวลา 10 นาที จากนั้นจึงเติมสารละลายไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 3% ลงไปทีละหยดจนกระทั่งสีหายไป เมื่อเติมไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์สารสกัดจะเขย่าอย่างต่อเนื่อง สารละลายสแตนนัสคลอไรด์ 0.2 มิลลิลิตรและสารละลายโซเดียมไฮโดรซัลไฟต์ 2.5% 0.1 มิลลิลิตรจะถูกเติมลงในสารสกัดเพื่อฟื้นฟูสิ่งเจือปนจากฟลูออเรสเซนต์ สารสกัดจะถูกเขย่าแรงๆ เป็นเวลา 20 นาที เพื่อเปลี่ยนไรโบฟลาวินที่รีดิวซ์แบบผันกลับได้ให้กลายเป็นฟลูออเรสเซนต์แบบออกซิไดซ์ ปริมาตรของสารสกัดจะถูกปรับเป็น 15 มล. ด้วยน้ำ หากมีความขุ่นสารละลายจะถูกกรอง ในสารสกัดที่เตรียมไว้ ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์จะถูกกำหนดโดยเปรียบเทียบกับความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ของสารละลายมาตรฐานของไรโบฟลาวิน ในการทำเช่นนี้ สารสกัดและสารละลายการทำงานของไรโบฟลาวิน (ดูด้านล่าง "การเตรียมรีเอเจนต์") จะถูกเทลงในคิวเวตต์ 8-10 มิลลิลิตรของฟลูออโรมิเตอร์ และวัดความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ในระดับกัลวาโนมิเตอร์ จากนั้น เติมโซเดียมไฮโดรเจนคาร์บอเนต 0.1 กรัมและไฮโดรซัลไฟต์ 0.1 กรัมลงในคิวเวตทั้งสอง ผสมเนื้อหาของคิวเวตและวัดความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์อีกครั้ง ในสารละลายมาตรฐานของไรโบฟลาวิน การเรืองแสงจะถูกดับลงเป็นศูนย์ และในสารสกัดภายใต้การศึกษายังคงมีการเรืองแสงเล็กน้อย ซึ่งเกิดจากการมีสิ่งเจือปนจากฟลูออเรสเซนต์ซึ่งไม่ได้ถูกกำจัดออกทั้งหมดเมื่อสารสกัดได้รับการบำบัดด้วยรีเอเจนต์ข้างต้น เพื่อให้แน่ใจว่าการดับของสารเรืองแสงไรโบฟลาวินโดยสมบูรณ์ จึงมีการเติมไฮโดรซัลไฟต์ 0.1 กรัมลงในตัวอย่าง และวัดความเข้มของสารเรืองแสงอีกครั้ง เมื่อหมาดจนสนิท ค่าที่อ่านได้ของกัลวาโนมิเตอร์ไม่ควรเปลี่ยนแปลง ปริมาณไรโบฟลาวินในหน่วยไมโครกรัมต่อสาร 1 กรัม (x) คำนวณโดยใช้สูตร
โดยที่ A คือการอ่านค่าฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายทดสอบ (การอ่านครั้งแรก) B - การอ่านค่าฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายทดสอบหลังการดับ (การอ่านครั้งที่สอง) C - การอ่านฟลูออโรมิเตอร์สำหรับสารละลายมาตรฐานที่มีไรโบฟลาวิน 0.4 ไมโครกรัมใน 1 มล. 0.4 - ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน μg; g—น้ำหนักของผลิตภัณฑ์, g; V - ปริมาตรของการเจือจางทั้งหมด, มล.
การเตรียมรีเอเจนต์พื้นฐาน
1. สารละลายไรโบฟลาวินมาตรฐาน ตัวอย่างไรโบฟลาวิน 10 มก. ละลายในน้ำกลั่นในขวดวัดปริมาตรขนาด 250 มล. สารละลาย 1 มิลลิลิตรประกอบด้วยไรโบฟลาวิน 40 ไมโครกรัม สารละลายไม่เปลี่ยนแปลงเป็นเวลา 1 เดือนเมื่อเก็บในที่เย็นและมืด ก่อนการพิจารณา ให้เตรียมสารละลายสำหรับการทำงาน โดยเติมสารละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 20% 37.5 มล., สารละลายไดโพแทสเซียมฟอสเฟต 4 โมลาร์ 25 มล., สารละลายมาตรฐานของไรโบฟลาวิน 1 มล. ลงในขวดปริมาตร 100 มล. และนำไปถึงที่หมายด้วยน้ำ สารละลายทำงาน 1 มิลลิลิตรประกอบด้วยไรโบฟลาวิน 0.4 ไมโครกรัม
2. ส่วนผสมบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (pH 7.8-8.0) เตรียมสารละลาย 1/15 โมลาร์ของโซเดียมฟอสเฟตไดเบสิก (Na2HPO4-2H2O ที่ตกผลึกใหม่ 11.876 กรัมในน้ำ 1 ลิตร) และสารละลาย 1/15 โมลาร์ของโพแทสเซียมฟอสเฟตที่ตกผลึกซ้ำ (9.078 กรัมของ KH2PO4 ที่ตกผลึกใหม่ในน้ำ 1 ลิตร) ผสมสารละลายแรก 9.5 ส่วนและสารละลายที่สอง 0.5 ส่วน
3. สารละลายสแตนนัสคลอไรด์ ดีบุกคลอไรด์ 10 กรัม (SnCl2) ละลายในกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 25 มล. สารละลายสต๊อกที่ได้จะถูกเก็บไว้ในขวดสีเข้มโดยมีจุกปิดที่อุณหภูมิห้อง ก่อนการพิจารณาแต่ละครั้ง ให้เตรียมสารละลายที่ใช้ได้โดยการเจือจางสารละลายสต๊อก 0.2 มิลลิลิตรกับน้ำให้เป็น 100 มิลลิลิตร
4. สารละลายโซเดียมไฮโดรซัลไฟต์ Na2S2O4-2H2O 0.25 กรัมละลายในสารละลายโซเดียมไบคาร์บอเนต 2% 10 มล. เตรียมสารละลายก่อนใช้งาน
5. การเตรียมเอนไซม์: ทริปซิน, ตับอ่อนหรือการเตรียมเอนไซม์จากเพนิซิลเลียม notatum
การหาปริมาณกรดนิโคตินิก (วิตามิน PP)
ในผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติ วิตามิน PP (กรดนิโคตินิก) พบได้ในรูปแบบอิสระและยึดเกาะ: เช่นกรดนิโคตินิก C6H5O2N หรือเอไมด์ C6H6ON2 สำหรับการหาปริมาณกรดนิโคตินิก ซึ่งขึ้นอยู่กับอันตรกิริยาของกรดนิโคตินิกกับไทโอไซยาเนตโบรไมด์หรือไซยาไนด์ สารประกอบที่เกิดขึ้นเมื่อมีอะโรมาติกเอมีน (อะนิลีน, เมตอล) ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกลางหรือเป็นกรดเล็กน้อยจะให้สีที่เป็นอนุพันธ์ สีเหลือง. ความเข้มสีของสารละลายทดสอบเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณของกรดนิโคตินิก และวัดด้วยการวัดสี
วิธีการกำหนดนำตัวอย่างของผลิตภัณฑ์ทดสอบแบบบดในปริมาณ 5 กรัม ถ่ายโอนไปยังขวดปริมาตรขนาด 100 มล. และเติม 2-N 75 มล. สารละลายกรดซัลฟิวริกล้างช่องทางและคอขวดด้วยสารละลายของกรดนี้ เนื้อหาของขวดจะถูกคนอย่างแรง วางขวดไว้ในอ่างน้ำเดือด และให้ความร้อนสารที่อยู่ภายในเป็นเวลา 90 นาที โดยคนเป็นครั้งคราว หลังจากนั้นขวดจะถูกทำให้เย็นลงนำส่วนผสมไปที่เครื่องหมายด้วยน้ำกลั่นผสมให้เข้ากันแล้วกรองผ่านตัวกรองกระดาษ (ผลไฮโดรไลเสตที่ได้สามารถทิ้งไว้ในความเย็นได้จนถึงวันถัดไป)
นำของเหลวที่กรองได้ 25 มล. ใส่ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. เติมฟีนอล์ฟทาลีน 1 หยด และเติม 10 N สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์จนได้สีชมพูอ่อน (ประมาณ 4 มล.) อัลคาไลส่วนเกินจะถูกกำจัดด้วย 5 N 1-2 หยด กรดซัลฟูริก (จนสีชมพูหายไป) หากสารละลายได้รับความร้อน ให้ทำให้เย็นลง จากนั้นเติมสารละลายซิงค์ซัลเฟต 2 มล. และไอโซเอมิลแอลกอฮอล์ 1-2 หยด (เพื่อกำจัดโฟม) จากนั้น ขณะกวนสิ่งที่อยู่ในขวด ให้เติมสารละลาย 4 N ลงไปทีละหยด โซดาไฟจนเกิดตะกอนสังกะสีไฮดรอกไซด์หนา การตกตะกอนเสร็จสมบูรณ์โดยเติมสารละลาย 1 N โซดาไฟจนกลายเป็นสีชมพูอ่อน เติม 5 N 1-2 หยดลงในขวด กรดซัลฟูริก (จนสีชมพูหายไป) แล้วพักไว้ 10 นาที โดยคนเป็นครั้งคราว ผสมน้ำกลั่นลงในขวดจนเป็นปริมาตร 50 มล. กวนและกรองผ่านกระดาษกรอง ผลการกรองที่ได้จะถูกนำมาใช้เพื่อทำปฏิกิริยากับสีเพื่อจุดประสงค์นี้จะใช้หลอดทดลองพิเศษที่มีตัวกั้นกราวด์ซึ่งเสียบเข้าไปในที่ยึดแบบกลม ในเวลาเดียวกัน เมื่อทำปฏิกิริยาสีของสารละลายทดสอบ การดำเนินการที่คล้ายกันจะถูกทำซ้ำกับสารละลายมาตรฐานของกรดนิโคตินิก ในเวลาเดียวกัน จะมีการควบคุมรีเอเจนต์สำหรับสารละลายมาตรฐานและเอมีนสำหรับผู้เข้ารับการทดสอบ
รายการโซลูชันที่ใช้ในการวิเคราะห์แสดงไว้ในตาราง 5.
ในการดำเนินการปฏิกิริยาสี สารละลายมาตรฐานของกรดนิโคตินิก 5 มล. จะถูกเทลงในหลอดทดลองสองหลอด (การวัดแบบคู่ขนาน) และเทน้ำกลั่น 5 มล. ลงในหลอดทดลองสองหลอด จากนั้นเทสารละลายทดสอบ 5 มล. ลงในสี่หลอด หลอดทดลองอื่นๆ หลอดทดลองทั้งหมดที่วางอยู่ในชั้นวางจะถูกแช่ในอ่างที่อุณหภูมิ 50 ° C เป็นเวลา 5 นาที หลังจากนั้นจึงเติมสารละลายโรเดนโบรไมด์ 2 มล. ใต้ร่างบิวเรตตามตาราง 5 (ไม่รวมกลุ่มควบคุมเอมีน) ของเหลวในหลอดทดลองผสมกันแล้วทิ้งในอ่างเป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิ 50°C หลอดทดลองจะถูกทำให้เย็นลง น้ำเย็นถึงอุณหภูมิห้อง ใส่ในกล่องไม้ที่มีรังสำหรับหลอดทดลอง ปิดกล่องพร้อมฝาปิด พักไว้ในที่มืดเป็นเวลา 10 นาที เติมสารละลายเมตอล 3 มล. ลงในหลอดทดลอง ผสมสารที่บรรจุไว้แล้วทิ้งไว้ในกล่องปิดเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในที่มืด
หลังจากผ่านไปหนึ่งชั่วโมง ผลลัพธ์ที่ได้จะถูกกำหนดด้วยเครื่องวัดสีโดยใช้โฟโตอิเล็กโตรคัลเลอร์มิเตอร์โดยใช้ตัวกรองสีน้ำเงินในคิวเวทต์ที่มีความหนาของชั้น 10 มม. ปริมาณกรดนิโคตินิกคำนวณได้ดังนี้ ตั้งค่าความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายทดสอบ (n) และมาตรฐาน (n1) โดยคำนึงถึงการแก้ไขสำหรับการควบคุม
โดยที่ A คือความหนาแน่นทางแสงของสารละลายทดสอบ A1 - เหมือนกันมาตรฐาน; B คือความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายควบคุมเอมีน B1 - ความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายควบคุมสำหรับรีเอเจนต์
ในอนาคตหากต้องการคำนวณปริมาณกรดนิโคตินิกในหน่วย mg% (x) ให้ใช้สูตรต่อไปนี้:
โดยที่ G คือปริมาณของกรดนิโคตินิกในสารละลายมาตรฐาน 1 มล. มก. n คือความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายทดสอบโดยคำนึงถึงสารละลายควบคุม n1 คือความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายมาตรฐานโดยคำนึงถึงโซลูชันการควบคุม ก. - น้ำหนัก, ก.; V คือปริมาตรรวมของไฮโดรไลเสต, มล.; V1 - ปริมาตรของไฮโดรไลเสตที่ใช้เพื่อทำให้บริสุทธิ์ด้วยซิงค์ซัลเฟต, มล. V2 คือปริมาตรสุดท้ายของสารละลายหลังจากเติมซิงค์ซัลเฟต, มล.
การเตรียมรีเอเจนต์
1. สารละลายมาตรฐานของกรดนิโคตินิก (พื้นฐาน) ใส่กรดนิโคตินิก 500 มก. ในขวดขนาด 500 มล. เติม 10 N 5 มล. H2SO4 และเมื่อผลึกละลาย ให้เติมน้ำกลั่นลงไปถึงเครื่องหมาย สารละลาย 1 มิลลิลิตรประกอบด้วยกรดนิโคตินิก 1,000 ไมโครกรัม สารละลายนี้เหมาะสำหรับเก็บในที่เย็นเป็นเวลา 1 ปี
2. โซลูชันมาตรฐาน - การทำงาน สารละลายมาตรฐานพื้นฐาน 5 มล. เจือจางเป็น 1 ลิตรด้วยน้ำกลั่น สารละลาย 1 มิลลิลิตรประกอบด้วยกรดนิโคตินิก 5 ไมโครกรัม (เตรียมสารละลายทุกวัน)
3. สารละลายโรเดนโบรไมด์ (เตรียมก่อนใช้งาน) เตรียมน้ำโบรมีนโดยการเติมโบรมีนลงในน้ำกลั่นจนกระทั่งหยดโบรมีนหยุดละลาย สำหรับน้ำโบรมีนที่ระบายความร้อนด้วยน้ำแข็ง ซึ่งใช้ในปริมาณที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ ให้เติมสารละลายโพแทสเซียมหรือแอมโมเนียมไทโอไซยาเนต 10% ลงไปทีละหยดจนกระทั่งเปลี่ยนเป็นสีเหลืองอ่อน จากนั้นจึงเติมสารละลาย 1% ของรีเอเจนต์เดียวกันจนกว่าน้ำโบรมีนจะเปลี่ยนสีไปโดยสิ้นเชิง ค่อยๆ เติมแคลเซียมคาร์บอเนต 20-50 มก. ในปริมาณเล็กน้อยทีละน้อย จนกระทั่งฟองอากาศและการก่อตัวของความขุ่นหยุดลง สารละลายจะถูกกรองลงในขวดแก้วสีเข้มพร้อมจุกบดและเก็บไว้ในที่เย็น
4. สารละลายเมทอล 8% (เตรียมก่อนใช้) เมตอลที่ตกผลึกซ้ำ 8 กรัมละลายใน 0.5 N สารละลาย HCl และถ่ายโอนไปยังกระบอกสูบหรือขวดตวงขนาด 100 มล. สารละลายจะถูกปรับเป็นเครื่องหมาย 0.5 N เอชซีแอล
การตกผลึกใหม่ของเมตอล 500 มล. 0.1 น. H2SO4 ถูกให้ความร้อนจนเดือด โดยเติมเมตอล 100 กรัม ที่ผสมกับ NaHSO3 0.7 กรัม ลงในสารละลายเดือด ส่วนผสมถูกทำให้ร้อนจนเดือด ถ้าสารละลายมีสีเข้ม ให้เติม 10 กรัม ถ่านกัมมันต์. ของผสมจะถูกถ่ายโอนไปยังกรวย Buchner ที่ได้รับความร้อนและกรองทันที กรองจะถูกถ่ายโอนไปยังบีกเกอร์, โซเดียมไบซัลไฟต์ 0.3 กรัมและแอลกอฮอล์ 96% 700 มล. ผสมทุกอย่างแช่ในน้ำเย็นแล้วทิ้งไว้ในที่มืดเป็นเวลาหลายชั่วโมง ผลึกของเมตอลที่ตกตะกอนจะถูกกรองผ่านกรวย Buchner แล้วล้างบนกรวยด้วยแอลกอฮอล์ 96% จากขวดสเปรย์ แล้วทำให้แห้งในอากาศในที่มืด เมตอลที่ตกผลึกใหม่จะถูกเก็บไว้ในขวดแก้วสีเข้มโดยมีจุกปิดในที่มืด
1. วิตามินบี 1 (ไทอามีน)
ก) ด้วยรีเอเจนต์ไดโซโซ
หลักการของวิธีการขั้นแรก diazobenzenesulfate (กรด diazobenzenesulfonic) เกิดขึ้น:
สารละลายไทอามีนด้วยการเติมไดโซเบนซีนซัลเฟตและอัลคาไลจะทำให้สารประกอบมีสี
ความคืบหน้า.สิ่งต่อไปนี้จะถูกเพิ่มตามลำดับในหลอดทดลอง:
b) ออกซิเดชันกับไทโอโครม
หลักการของวิธีการเมื่อสัมผัสกับ K 3 Fe(CN) 6 ในตัวกลางที่เป็นด่าง ไทอามีนจะถูกออกซิไดซ์เป็นไทโอโครมสีเหลือง ซึ่งมีแสงเรืองแสงสีน้ำเงินในแสงยูวี
ความคืบหน้า.ไทอามีนโบรไมด์หรือผงไทอามีนคลอไรด์ 10 มก. ละลายในน้ำ 5 มล. สารละลายโพแทสเซียมเหล็กซัลไฟด์ 5% K 3 Fe(CN) 6 1 มล. (โพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์) และสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 10% ถูกเพิ่มและผสม ครึ่งหนึ่งของปริมาตรที่ได้จะถูกทำให้ร้อนและสังเกตเห็นสีเหลืองอันเป็นผลมาจากการเปลี่ยนไทอามีนเป็นไทโอโครม เติมบิวทิลหรือไอโซเอมิลแอลกอฮอล์ 3 มล. ลงในอีกครึ่งหนึ่ง เขย่าขวดให้เข้ากันแล้วทิ้งไว้สักครู่ ชั้นแอลกอฮอล์ด้านบนจะถูกใส่ลงในภาชนะที่ทำจากแก้วที่ไม่เรืองแสงด้วยเครื่องจ่าย และตรวจด้วยแสงยูวี (หรือในรังสีของหลอดปรอทควอทซ์ในห้องมืด) เรืองแสงสีน้ำเงินมองเห็นได้ชัดเจน
c) นำสเปกตรัมการดูดกลืนแสง (โมดูล "สเปกตรัม" ซึ่งมีช่วงตั้งแต่ 350 ถึง 220 นาโนเมตร) และสังเกตค่าสูงสุดที่ แล = 250-260 นาโนเมตร บันทึกกราฟ ถ่ายโอนไปยัง Paint จากนั้นวางลงในไฟล์ “Graphs” (เอกสาร Word) เซ็นชื่อและวางลงในรายงาน ความสนใจ! ทานสเปกตรัมของวิตามินทั้งหมด พร้อมกันเพื่อเปิดและอุ่นเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์เพียงครั้งเดียว 
สเปกตรัม UV ของไทอามีน ไฮโดรคลอไรด์ (8 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในสารละลาย HCl 0.9% สูงสุดที่ 246 นาโนเมตร
2. วิตามินบี 2 (ไรโบฟลาวิน)
ก) ด้วยสังกะสีโลหะ
หลักการของวิธีการไรโบฟลาวินจะถูกรีดิวซ์โดยไฮโดรเจนที่ถูกปลดปล่อยให้เป็นลิวโคฟลาวินที่ไม่มีสี มีการเปลี่ยนสีจากเหลืองเป็นเขียวต่อมาเป็นสีแดงเข้มชมพูแล้วสีก็หายไป
ความคืบหน้า.สารแขวนลอยไรโบฟลาวิน 1 มิลลิลิตรในน้ำ (สารละลาย 0.015 - 0.025%) เทลงในหลอดทดลอง เติม HCl เข้มข้น 10 หยด และสังกะสีโลหะชิ้นหนึ่งหล่น ฟองไฮโดรเจนจะเริ่มปล่อยออกมาอย่างรวดเร็ว และของเหลวจะค่อยๆ เปลี่ยนเป็นสีชมพูหรือสีแดง จากนั้นสีของของเหลวจะเริ่มจางลงและเปลี่ยนสี (ปฏิกิริยาออกซิเดชันย้อนกลับของลิวโคฟลาวินไปเป็นไรโบฟลาวิน)
b) ด้วยซิลเวอร์ไนเตรต
หลักการของวิธีการสารละลายไรโบฟลาวินที่เป็นกลางหรือเป็นกรดเล็กน้อย (pH 6.5-7.2) ซึ่งทำปฏิกิริยากับ AgNO 3 ให้สารประกอบของโทนสีชมพูแดง ความเข้มของสีขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของวิตามิน
ความคืบหน้า.ต่อสารละลายไรโบฟลาวิน 1 มิลลิลิตร (0.015 - 0.025%) ให้เติมสารละลาย AgNO 3 0.5 มิลลิลิตร (0.1%) สีชมพูปรากฏขึ้น
c) การเรืองแสงใน UV + การดับหลังจากเติม SnCl 2 + Na 2 S 2 O 4 ซึ่งดับการเรืองแสงของวิตามินเอง แต่ไม่ใช่ของเจือปน การเรืองแสงของไรโบฟลาวินสูงสุดที่ pH 3.5-7.5 บันทึกสเปกตรัมในสารละลายโซเดียมอะซิเตต
สเปกตรัม UV ของไรโบฟลาวิน (35 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในสารละลายโซเดียมอะซิเตต CH 3 COONa
0.01% สูงสุดที่ 266.5 นาโนเมตร จุดสูงสุดเพิ่มเติมที่ 223.0 นาโนเมตร, 373.5 นาโนเมตร และ 444.5 นาโนเมตร
3. วิตามินบี 5 (พีพี, กรดนิโคตินิก)
ก) ด้วยคอปเปอร์อะซิเตท
หลักการของวิธีการเมื่อกรดนิโคตินิกถูกให้ความร้อนด้วยคอปเปอร์อะซิเตต จะเกิดการตกตะกอนของเกลือคอปเปอร์ของกรดนิโคตินิก
ความคืบหน้า.กรดนิโคตินิก 5-10 มก. ละลายเมื่อถูกความร้อนในสารละลายกรดอะซิติก 10-20 หยด (หรือเตรียม 0.75% สารละลายนิโคตินกรดเข้า น้ำร้อนจากนั้นเติมสารละลายกรดอะซิติก 15% 1 มิลลิลิตรลงในสารละลายนี้ 2 มิลลิลิตร) ถึง ถูกทำให้ร้อนจนเดือดเติมสารละลายคอปเปอร์อะซิเตต 5% ในปริมาตรเท่ากันลงในสารละลาย ของเหลวกลายเป็นสีฟ้าขุ่น และเมื่อยืนและเย็นตัวลง จะเกิดการตกตะกอนของคอปเปอร์นิโคติเนตสีน้ำเงิน
b) กลิ่นไพริดีน
หลักการของวิธีการเมื่อให้ความร้อนกับกรดนิโคตินิกด้วย Na 2 CO 3 ที่ไม่มีน้ำจะรู้สึกได้ กลิ่นเหม็นไพริดีน
ความคืบหน้า. ในถ้วยใส่ตัวอย่างพอร์ซเลนแห้งขนาดเล็ก ให้ผสมกรดนิโคตินิก 0.05 กรัม กับแอนไฮดรัสโซเดียมคาร์บอเนต 0.1-0.15 กรัม และความร้อน มีกลิ่นฉุนของไพริดีนปรากฏขึ้น
4. วิตามินบี 6 (ไพริดอกซิ)
ก) ด้วยเฟอร์ริกคลอไรด์
หลักการของวิธีการวิตามินบี 6 ก่อให้เกิดสารเชิงซ้อนสีแดงเลือดกับเฟอร์ริกคลอไรด์
ความคืบหน้า.สารละลายไพริดอกซิ 0.5-1% 4 มล. + 0.5 มล. 1% FeCl 3 → เขย่าแล้วสังเกตสีแดง
b) นอกจากนี้ –
c) ใช้สเปกตรัมใน 0.1 M NaOH (สังเกตค่าสูงสุดที่ แล = 245 และ 308 นาโนเมตร) หรือน้ำ (ดูรูป)
สเปกตรัม UV ของไพริดอกซิ ไฮโดรคลอไรด์ (15 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในน้ำ (pH-6.0) สูงสุดที่ 291 นาโนเมตร
5. วิตามินบี 12 – ทำให้เป็นทางการในรายงาน แต่ในทางปฏิบัติ เราไม่ได้ทำเช่นนี้เนื่องจากมีความเป็นพิษสูงของรีเอเจนต์ที่ทำงานอยู่
วิตามินบี 12 ทำปฏิกิริยากับไซยาไนด์ที่ pH = 10 ทำให้เกิดไดยาโนโคบาลามินสีม่วง เนื่องจาก Co ถูกออกซิไดซ์เป็น 3-วาเลนต์ และ 5'-ดีออกซีอะดีโนซีนจะถูกแทนที่ด้วยไอออน CN
6. วิตามินพี (ใช้รูตินเป็นตัวอย่าง)
สารที่มีฤทธิ์ของวิตามิน P ประกอบด้วยสารประกอบฟีนอลจำนวนหนึ่งซึ่งผลทางสรีรวิทยาหลักคือลดการซึมผ่านและเพิ่มความแข็งแรงของเส้นเลือดฝอย พวกเขาส่งเสริมการดูดซึมวิตามินซีในร่างกายมนุษย์และสัตว์มีส่วนร่วมอย่างแข็งขันในกระบวนการรีดอกซ์มีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระยับยั้งเหนือสิ่งอื่นใดการเกิดออกซิเดชันของอะดรีนาลีน พวกเขายังยับยั้งเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสด้วยซึ่งจะช่วยยับยั้งการสลาย กรดไฮยาลูโรนิก– เฮเทอโรโพลีแซ็กคาไรด์ในสารพื้นของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน วิต P ยับยั้งการทำงานของโคลีนเอสเตอเรส ซัคซิเนตดีไฮโดรจีเนส และเอนไซม์อื่นๆ อีกหลายชนิด
ฟลาโวนอลจำนวนหนึ่ง (รูติน, เควอซิติน), ฟลาโวโนน, คาเทชิน, คูมาริน, กรดแกลลิกและอนุพันธ์ของมัน, แอนโทไซยานิน (สารแต่งสีจากผลไม้, ผลเบอร์รี่, ดอกไม้) มีคุณสมบัติเป็นวิตามิน
สาร P-วิตามินหลายชนิดคือไกลโคไซด์ของฟลาโวนอลและฟลาโวโนนหรืออะไกลโคน (ส่วนประกอบที่ไม่ใช่คาร์โบไฮเดรตของไกลโคไซด์) ตัวอย่างเช่น รูตินคือไกลโคไซด์ซึ่งมีไดแซ็กคาไรด์ รูทิโนซิสเพิ่มอะไกลโคนที่มีโครงสร้างฟีนอลิก ฟลาโวนอล เควอซิติน
ก) ด้วยเฟอร์ริกคลอไรด์
b) ด้วยกรดซัลฟิวริก
หลักการ:กรดซัลฟิวริกเข้มข้นก่อให้เกิดเกลือออกโซเนียมที่มีฟลาโวน (รูติน) ซึ่งในสารละลายมี สีเหลือง. ฟลาวาโนน (เช่น เฮสเพอริดิน) ให้สีแดงเข้มพร้อมกำมะถัน
7. วิตามินซี
ก) ในเชิงคุณภาพ - ด้วย K 3 Fe(CN) 6
หลักการของวิธีการ:การลดลงของโพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์ด้วยวิตามินซีโดยเปลี่ยนสีเป็นสีน้ำเงินเนื่องจากการก่อตัวของปรัสเซียนบลู
ความคืบหน้า.ในหลอดทดลองสองหลอด ให้ผสมสารละลาย 5% ของ K 3 Fe(CN) 6 5 หยด กับสารละลาย 1% ของ FeCl 3 5 หยด เติมสารละลายกรดแอสคอร์บิกหรือน้ำกะหล่ำปลี 1% 20 หยดลงในหลอดทดลองหนึ่งหลอดลงในของเหลวสีน้ำตาลแกมเขียว และเติมน้ำกลั่นในปริมาณเท่ากันลงในอีกหลอดหนึ่ง ของเหลวในหลอดทดลองหลอดแรกจะได้สีเขียวแกมน้ำเงิน และตะกอนสีน้ำเงินของปรัสเซียนบลูก็ตกตะกอน ในหลอดทดลองที่สอง (ชุดควบคุม) ของเหลวสีน้ำตาลแกมเขียวยังคงไม่เปลี่ยนแปลง
ประสบการณ์ 1.การกำหนดปริมาณวิตามินซี
หลักการของวิธีการ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความสามารถของวิตามินซีในการลด 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล ซึ่งมีสีแดงในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด และจะเปลี่ยนสีเมื่อลดลง ในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่างสีจะเป็นสีน้ำเงิน เพื่อป้องกันวิตามินซีจากการถูกทำลาย สารละลายทดสอบจะถูกไตเตรทในตัวกลางที่เป็นกรดด้วยสารละลายอัลคาไลน์ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล จนกระทั่งกลายเป็นสีชมพู
ในการคำนวณปริมาณวิตามินซีในผลิตภัณฑ์ต่างๆ เช่น กะหล่ำปลี มันฝรั่ง ต้นสน โรสฮิป ฯลฯ ให้ใช้สูตร:
ที่ไหน เอ็กซ์– ปริมาณวิตามินซีเป็นมิลลิกรัมต่อผลิตภัณฑ์ 100 กรัม 0.088 – ปริมาณแอสคอร์บิกแอซิด, มก.; ก– ผลลัพธ์ของการไตเตรทด้วยสารละลาย 0.001 N ของ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล, มล.; บี –ปริมาตรของสารสกัดที่ใช้สำหรับการไตเตรท, มล.; ใน -จำนวนผลิตภัณฑ์ที่นำมาวิเคราะห์ g; ช– จำนวนสารสกัดทั้งหมด, มล.; 100 – การแปลงต่อ 100 กรัมของผลิตภัณฑ์
สรุป: เขียนผลการทดลองและข้อมูลที่คำนวณได้
การทดลอง 1.1. การกำหนดปริมาณวิตามินซีในกะหล่ำปลี
ลำดับงาน.
ชั่งน้ำหนักกะหล่ำปลี 1 กรัมบดในครกด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 10% 2 มล. (HCl - กรดไฮโดรคลอริก, กรดไฮโดรคลอริก, กรดไฮโดรคลอริก) เติมน้ำ 8 มล. และกรอง วัดตัวกรองสำหรับการไตเตรท 2 มล. เติมสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 10% 10 หยดและไตเตรทด้วย 2,6-dichlorophenolindophenol จนกระทั่งสีชมพูคงอยู่เป็นเวลา 30 วินาทีตามนี้ หลักการของวิธีการปฏิกิริยา คำนวณปริมาณวิตามินซีในกะหล่ำปลี 100 กรัมโดยใช้สูตรที่ให้ไว้ข้างต้น กะหล่ำปลี 100 กรัม มีวิตามินซี 25-60 มก. โรสฮิป 100 กรัม 500-1500 มก. และเข็มสน 200-400 มก.
การทดลอง 1.2. การหาปริมาณวิตามินซีในมันฝรั่ง
ลำดับงาน.
ชั่งน้ำหนักมันฝรั่ง 5 กรัมบดในครกด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 10% 20 หยด (เพื่อไม่ให้มันฝรั่งเข้มขึ้น) ค่อยๆ เติมน้ำกลั่น - 15 มล. มวลที่ได้จะถูกเทลงในแก้ว ปูนจะถูกล้างด้วยน้ำ เทลงบนแท่งแก้วลงในแก้ว และไตเตรทด้วย 0.001 N สารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol ให้เป็นสีชมพูตามนี้ หลักการของวิธีการปฏิกิริยา มันฝรั่ง 100 กรัม มีวิตามินซี 1-5 มก.
สรุป: เขียนผลการทดลอง
การทดลอง 1.3 การหาปริมาณวิตามินซีในปัสสาวะ
การกำหนดปริมาณวิตามินซีในปัสสาวะช่วยให้ทราบถึงปริมาณวิตามินนี้ในร่างกายเนื่องจากมีความสอดคล้องกันระหว่างความเข้มข้นของวิตามินซีในเลือดกับปริมาณของวิตามินนี้ที่ถูกขับออกทางปัสสาวะ อย่างไรก็ตาม ด้วยภาวะ hypovitaminosis C ปริมาณของกรดแอสคอร์บิกในปัสสาวะจะไม่ลดลงเสมอไป มักเป็นเรื่องปกติแม้ว่าจะมีการขาดวิตามินนี้ในเนื้อเยื่อและอวัยวะก็ตาม
ในคนที่มีสุขภาพดี การให้วิตามินซี 100 มก. ทางปากอย่างรวดเร็วทำให้ความเข้มข้นของวิตามินซีในเลือดและปัสสาวะเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว ด้วยภาวะ hypovitaminosis C เนื้อเยื่อที่ขาดวิตามินซีจะคงวิตามินซีที่กินเข้าไปและความเข้มข้นของวิตามินซีในปัสสาวะจะไม่เพิ่มขึ้น ปัสสาวะของคนที่มีสุขภาพแข็งแรงประกอบด้วยวิตามินซี 20-30 มก. หรือ 113.55-170.33 µmol/วัน ในเด็กระดับวิตามินนี้จะลดลงเมื่อมีเลือดออกตามไรฟันรวมถึงโรคติดเชื้อเฉียบพลันและเรื้อรัง
บทนำ……………………………………………………………………2
1. ภาพรวมทั่วไปของวิธีการตรวจวิตามิน…………3
2. วิธีโครมาโตกราฟีในการหาวิตามิน…………5
3. วิธีเคมีไฟฟ้าในการหาวิตามิน…………10
4. การปอกวิธีการกำหนดโวลแทมเมทริก
วิตามินที่ละลายน้ำได้ บี 1 บี 2 ในผลิตภัณฑ์อาหาร………..13
สรุป…………………………………………...18
การแนะนำ
ปัจจุบันมีผลิตภัณฑ์อาหารเสริมสำหรับมนุษย์และอาหารสัตว์จำนวนมากซึ่งเป็นสารผสมหลายองค์ประกอบแบบแห้งปรากฏอยู่ในตลาด ช่วงของผลิตภัณฑ์ดังกล่าวค่อนข้างกว้าง ประการแรกคือวัตถุเจือปนอาหารออกฤทธิ์ทางชีวภาพ พรีมิกซ์ อาหารสำหรับสัตว์และนก และการเตรียมวิตามินรวม เกณฑ์สำหรับคุณภาพของผลิตภัณฑ์ดังกล่าวอาจเป็นการวิเคราะห์เนื้อหาของวิตามินและโดยเฉพาะอย่างยิ่งสิ่งสำคัญเช่นละลายน้ำได้และ วิตามินที่ละลายในไขมันปริมาณซึ่งควบคุมโดยเอกสารกำกับดูแลและมาตรฐานคุณภาพสุขาภิบาล
ใช้เพื่อกำหนดวิตามิน วิธีการต่างๆ. วิธีการวิเคราะห์แบบออพติคัลที่ใช้กันอย่างแพร่หลายคือรีเอเจนต์ที่ใช้แรงงานเข้มข้น ใช้เวลานาน และมีราคาแพง การใช้วิธีการโครมาโตกราฟีมีความซับซ้อนเนื่องจากการใช้อุปกรณ์ราคาแพง ทุกๆ ปีการแบ่งประเภทจะขยายออกไปและการผลิตอาหารก็เพิ่มขึ้น สูตรอาหารก็ได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้น อาหารเด็ก. ในทางกลับกัน ความต้องการในการตรวจสอบคุณภาพของผลิตภัณฑ์และปรับปรุงวิธีการตรวจวัดวิตามินก็เพิ่มขึ้น ข้อกำหนดทางการแพทย์และชีวภาพและ มาตรฐานด้านสุขอนามัยคุณภาพของวัตถุดิบอาหารและผลิตภัณฑ์อาหารแสดงถึงคุณค่าทางโภชนาการของผลิตภัณฑ์อาหารทารกประเภทและกลุ่มส่วนใหญ่เพื่อวัตถุประสงค์ต่างๆ
1. ภาพรวมทั่วไปของวิธีการตรวจวิตามิน
วิตามินเกือบทั้งหมดเกิดปฏิกิริยาออกซิเดชัน ไอโซเมอไรเซชันได้ง่าย และถูกทำลายภายใต้อิทธิพลของอุณหภูมิ แสง ออกซิเจนในบรรยากาศ ความชื้น และปัจจัยอื่นๆ
จาก วิธีการที่มีอยู่สำหรับการกำหนดวิตามินซี (กรดแอสคอร์บิก) วิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดคือการไตเตรทด้วยภาพและโพเทนชิโอเมตริกด้วยสารละลาย 2,6-di-chlorophenolindophenol ตาม GOST 24556-81 โดยพิจารณาจากคุณสมบัติการลดของกรดแอสคอร์บิกและความสามารถในการ ลด 2,6-DCPIP สีน้ำเงินเข้มของตัวบ่งชี้นี้จะไม่มีสีเมื่อเติมกรดแอสคอร์บิก การเตรียมสารสกัดของผลิตภัณฑ์ที่อยู่ระหว่างการศึกษาเป็นสิ่งสำคัญ สารสกัดที่ดีที่สุดคือสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริก 6% ซึ่งจะไปยับยั้งแอสคอร์บิกแอซิดออกซิเดสและตกตะกอนโปรตีน
แคโรทีนในวัสดุจากพืช สารเข้มข้น และเครื่องดื่มไม่มีแอลกอฮอล์ควบคุมโดยวิธีเคมีกายภาพตาม GOST 8756.22-80 วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการกำหนดโฟโตเมตริกของเศษส่วนมวลของแคโรทีนในสารละลายที่ได้รับระหว่างการสกัดจากผลิตภัณฑ์ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ สารละลายจะถูกทำให้บริสุทธิ์ในขั้นแรกจากสารที่ให้สีที่มาพร้อมกันโดยใช้คอลัมน์โครมาโทกราฟี แคโรทีนละลายได้ง่ายในตัวทำละลายอินทรีย์ (อีเทอร์ น้ำมันเบนซิน ฯลฯ) และทำให้เกิดสีเหลือง สำหรับการวัดปริมาณแคโรทีน จะใช้โครมาโทกราฟีแบบดูดซับบนคอลัมน์ที่มีอะลูมิเนียมออกไซด์และแมกนีเซียมออกไซด์ การกำหนดเม็ดสีบนคอลัมน์นี้ขึ้นอยู่กับกิจกรรมของตัวดูดซับ ปริมาณของเม็ดสี และการมีอยู่ของส่วนประกอบอื่นๆ ในส่วนผสมที่ถูกแยกออกจากกัน ส่วนผสมที่แห้งของอะลูมิเนียมออกไซด์จะคงแคโรทีนไว้ และส่วนผสมที่เปียกจะทำให้สารแต่งสีอื่นๆ เข้าไปในสารละลายได้
ไทอามีนส่วนใหญ่พบในสถานะที่ถูกผูกไว้ในรูปแบบของไดฟอสฟอรัสเอสเทอร์ - โคคาร์บอกซิเลส ซึ่งเป็นกลุ่มออกฤทธิ์ของเอนไซม์หลายชนิด ด้วยความช่วยเหลือของกรดไฮโดรไลซิสและภายใต้อิทธิพลของเอนไซม์ ไทอามีนจะถูกปล่อยออกมาจากสถานะที่ถูกผูกไว้ วิธีนี้กำหนดปริมาณไทอามีน ในการคำนวณปริมาณวิตามินบี 1 จะใช้วิธีการฟลูออโรเมตริกซึ่งใช้ในการกำหนดไทอามีนในผลิตภัณฑ์อาหาร ขึ้นอยู่กับความสามารถของไทอามีนในการสร้างในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่างด้วยเฟอร์ริคาไนด์คาลาเนียมไทโอโครม ซึ่งให้แสงเรืองแสงที่รุนแรงในบิวทิลแอลกอฮอล์ ความเข้มข้นของกระบวนการได้รับการตรวจสอบโดยใช้ฟลูออโรมิเตอร์ EF-ZM
ในอาหารและเครื่องดื่ม ไรโบฟลาวินมีอยู่ในสถานะผูกมัด กล่าวคือ อยู่ในรูปของฟอสฟอรัสเอสเทอร์ที่จับกับโปรตีน ในการกำหนดปริมาณของไรโบฟลาวินในอาหารจำเป็นต้องปล่อยไรโบฟลาวินออกจากสถานะที่ถูกผูกไว้โดยการไฮโดรไลซิสของกรดและการรักษาด้วยการเตรียมเอนไซม์ วิตามินบี 1 ในน้ำอัดลมคำนวณโดยใช้วิธีทางเคมีเพื่อกำหนดปริมาณของไรโบฟลาวินในรูปแบบที่ไฮโดรไลซ์ได้ง่ายและเกาะติดกันแน่นในเนื้อเยื่อ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความสามารถของไรโบฟลาวินในการเรืองแสงก่อนและหลังรีดักชันด้วยโซเดียมไฮโปซัลไฟต์ การหาปริมาณรวมของสารประกอบฟีนอล ในการทำเช่นนี้ให้ใช้วิธีการวัดสี Folin-Denis ซึ่งขึ้นอยู่กับการก่อตัวของสารประกอบเชิงซ้อนสีน้ำเงินในระหว่างการลดกรด tungstic ภายใต้อิทธิพลของโพลีฟีนอลด้วยรีเอเจนต์ในตัวกลางที่เป็นด่าง สารประกอบฟีนอลิกถูกกำหนดโดยกรดคลอโรจีนิกโดยใช้โฟโตเมทรีเปลวไฟโดยใช้อุปกรณ์ EKF-2
2. วิธีโครมาโตกราฟีในการหาวิตามิน
เมื่อเร็วๆ นี้ วิธีการโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงได้รับการพัฒนาอย่างรวดเร็วในต่างประเทศ สาเหตุหลักมาจากการกำเนิดของโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีความแม่นยำและการปรับปรุงเทคนิคการวิเคราะห์ การใช้วิธี HPLC อย่างแพร่หลายในการตรวจวัดวิตามินก็สะท้อนให้เห็นในจำนวนสิ่งพิมพ์เช่นกัน จนถึงปัจจุบัน มากกว่าครึ่งหนึ่งของผลงานตีพิมพ์ทั้งหมดเกี่ยวกับการวิเคราะห์วิตามินที่ละลายในน้ำและไขมันเน้นไปที่การใช้วิธีนี้ โครมาโตกราฟีหลากหลายรูปแบบได้แพร่หลายในการตรวจหาวิตามิน
ในการชำระโทโคฟีรอลจากสิ่งเจือปนจากต่างประเทศจะใช้วิธีการโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง เมื่อใช้ร่วมกับวิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกและฟลูออริเมทริกวิธีนี้ยังใช้ในการตรวจวัดวิตามินอีในเชิงปริมาณเมื่อทำการแยกจะใช้แผ่นที่มีไซลูโฟลและดินเบา
การวิเคราะห์โทโคฟีรอลไอโซเมอร์ใน น้ำมันมะกอกดำเนินการโดยโครมาโทกราฟีแบบแก๊ส-ของเหลว เทคนิคการวิเคราะห์ GC และ GLC จำเป็นต้องมีการผลิตอนุพันธ์ที่ระเหยได้ ซึ่งเป็นเรื่องยากมากเมื่อวิเคราะห์วิตามินที่ละลายในไขมัน ด้วยเหตุนี้วิธีการกำหนดเหล่านี้จึงไม่มีการใช้กันอย่างแพร่หลาย การตรวจวัดวิตามินอีในผลิตภัณฑ์อาหาร ยา และวัตถุทางชีวภาพดำเนินการในโหมดเกรเดียนต์และไอโซคราติสทั้งในสภาวะปกติและเฟสย้อนกลับ ซิลิกาเจล (SG), kieselguhr, silasorb, ODS-Hypersil และตัวพาอื่น ๆ ถูกนำมาใช้เป็นตัวดูดซับ สำหรับการตรวจสอบองค์ประกอบของอีลูเอตในโครมาโตกราฟีของเหลวอย่างต่อเนื่องเมื่อวิเคราะห์วิตามินและเพิ่มความไวในการกำหนด UV (A = 292 นาโนเมตร) สเปกโตรโฟโตเมตริก (X = 295 นาโนเมตร) ฟลูออเรสเซนต์ (X = 280/325 นาโนเมตร) เคมีไฟฟ้า PMR และแมสสเปกโทรสโกปีเป็นเครื่องตรวจจับ
นักวิจัยส่วนใหญ่ชอบใช้โครมาโทกราฟีแบบดูดซับเพื่อแยกส่วนผสมของโทโคฟีรอลทั้งแปดไอโซเมอร์และอะซิเตตของไอโซเมอร์เหล่านั้น ในกรณีเหล่านี้ เฟสเคลื่อนที่มักเป็นไฮโดรคาร์บอนที่มีอีเทอร์ในปริมาณเล็กน้อย ตามกฎแล้ววิธีการที่ระบุไว้ในการพิจารณาวิตามินอีไม่ได้จัดให้มีการซาพอนิฟิเคชั่นเบื้องต้นของตัวอย่างซึ่งจะช่วยลดเวลาในการวิเคราะห์ได้อย่างมาก
การแยกด้วยการกำหนดปริมาณวิตามินที่ละลายในไขมัน (A, D, E, K) พร้อมกันเมื่อมีอยู่ร่วมกันใน การเตรียมวิตามินรวมดำเนินการทั้งในเฟสตรงและเฟสย้อนกลับ อย่างไรก็ตาม นักวิจัยส่วนใหญ่ชอบที่จะใช้ HPLC เวอร์ชันย้อนกลับ วิธี HPLC ช่วยให้คุณวิเคราะห์วิตามิน B1 และ B2 ที่ละลายในน้ำได้พร้อมกันและแยกกัน สำหรับการแยกวิตามิน จะใช้ HPLC เวอร์ชันรีเวิร์สเฟส ไอออนคู่ และการแลกเปลี่ยนไอออน มีการใช้ทั้งโหมดโครมาโตกราฟีแบบไอโซคราติคและแบบเกรเดียนต์ การแยกสารวิเคราะห์เบื้องต้นออกจากเมทริกซ์จะดำเนินการโดยการไฮโดรไลซิสของเอนไซม์และกรดของตัวอย่าง
ข้อดีของวิธีโครมาโตกราฟีของเหลว:
การตรวจจับส่วนประกอบหลายชิ้นพร้อมกัน
ขจัดอิทธิพลของส่วนประกอบที่รบกวน
คอมเพล็กซ์สามารถสร้างขึ้นใหม่ได้อย่างรวดเร็วเพื่อทำการวิเคราะห์อื่นๆ
องค์ประกอบและคุณลักษณะของอุปกรณ์และซอฟต์แวร์สำหรับโครมาโตกราฟีของเหลว "Khromos ZH-301":
ตารางที่ 1
|
ข้อดีของโครมาโตกราฟี "Chromos ZH-301":
การออกแบบปั๊มแรงดันสูงมีความเสถียรและความแม่นยำสูงในการรักษาอัตราการไหลของตัวชะ
มั่นใจในการเข้าถึงคอลัมน์ได้ง่ายด้วยการออกแบบอุปกรณ์
มั่นใจได้ถึงประสิทธิภาพของการแยกโดยการใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟีประสิทธิภาพสูง
ช่วงเชิงเส้นที่กว้างของสัญญาณการวัดของเครื่องตรวจจับโดยไม่ต้องเปลี่ยนขีดจำกัดการวัด ซึ่งช่วยให้คุณสามารถวัดจุดสูงสุดของความเข้มข้นทั้งสูงและต่ำได้อย่างแม่นยำสูง
การวิเคราะห์โครมาโตแกรมของวิตามินที่ละลายในน้ำ:
1 กรดแอสคอร์บิก (C)
2 กรดนิโคตินิก (ไนอาซิน)
3 ไพริดอกซิ (B6),
4 ไทอามีน (B1)
5 นิโคตินาไมด์ (B3),
6 กรดโฟลิก (M)
7 ไซยาโนโคบาลามิน (B12),
8 ไรโบฟลาวิน (B2)
การวิเคราะห์โครมาโตแกรมของวิตามินที่ละลายในไขมัน:
1. วิตามินเอ
2.โทคอล
3. y-โทโคฟีรอ
4. เอ-โทโคฟีรอล (วิตามินอี)
5.ลูทีน
6. ซีแซนทีน
7. คริปโตแซนธิน
8.เอ-แคโรทีน
แม้ว่าวิธี HPLC จะมีความไวสูง แต่เครื่องมือที่มีต้นทุนสูง ตลอดจนระยะเวลาของการวิเคราะห์เมื่อคำนึงถึงเวลาเตรียมตัวอย่าง ก็ได้จำกัดการใช้งานในห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ในประเทศของเราอย่างมาก
กระทรวงสาธารณสุขของสหพันธรัฐรัสเซีย
บทความเภสัชทั่วไป
วิธีการเชิงปริมาณโอเอฟเอส.1.2.3.0017.15
ความมุ่งมั่นของวิตามินแทนศิลปะ กฟจิน, ฉบับที่ 2
บทความนี้มีโครงร่าง หลักการทั่วไปการกำหนดวิตามินในสารและ แบบฟอร์มการให้ยาโดยใช้วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) วิธีสเปกโตรโฟโตเมทรี และไทไตรเมทรี
วิธีการมาตรฐานที่ให้มาช่วยให้สามารถกำหนดปริมาณของสารประกอบต่อไปนี้ได้: วิตามินเอ (เรตินอล, เรตินอลอะซีเตต และเรตินอลปาลมิเตต), วิตามินดี (โคเลแคลซิเฟอรอลและเออร์โกแคลซิเฟอรอล), วิตามินอี (เอ-โทโคฟีรอลและ — โทโคฟีรอลอะซิเตต), วิตามินเค 1 (ไฟโตเมนาไดโอน), บีแคโรทีน, วิตามินบี 1 (ไทอามีนคลอไรด์, ไทอามีนโบรไมด์และไทอามีนโมโนไนเตรต), บี 2 (ไรโบฟลาวิน, ไรโบฟลาวิน โมโนนิวคลีโอไทด์), บี 3 (กรดนิโคตินิก, นิโคตินาไมด์), บี 5 ( กรดแพนโทธีนิกและเกลือของมัน, แพนทีนอล), B 6 (ไพริดอกซิไฮโดรคลอไรด์), B C (กรดโฟลิก), B 12 (ไซยาโนโคบาลามิน), วิตามินซี (กรดแอสคอร์บิกหรือเกลือโซเดียมหรือแคลเซียม, แอสคอร์บิลปาลมิเตต) ง— ไบโอติน, รูติน