การกำหนดปริมาณวิตามินเอ การกำหนดปริมาณวิตามินบี 1 เปอร์ออกซิเดชันของไขมัน
สารอาหารจำเป็นซึ่งจัดกลุ่มตามชื่อทั่วไปว่า “วิตามิน” จัดอยู่ในประเภทต่างๆ สารประกอบเคมีซึ่งในตัวมันเองไม่รวมถึงความเป็นไปได้ของการใช้วิธีการเดียวในการกำหนดเชิงปริมาณ ล้วนขึ้นชื่อในเรื่องวิตามิน วิธีการวิเคราะห์ขึ้นอยู่กับการพิจารณาคุณสมบัติทางชีวภาพจำเพาะของสารเหล่านี้ (ทางชีวภาพ จุลชีววิทยา เอนไซม์) หรือการใช้คุณลักษณะทางเคมีกายภาพ (วิธีฟลูออเรสเซนต์ โครมาโตกราฟี และสเปกโตรโฟโตเมตริก) หรือขึ้นอยู่กับความสามารถของวิตามินบางชนิดในการทำปฏิกิริยากับรีเอเจนต์บางชนิด สร้างสารประกอบสี ( วิธีการวัดสี)
แม้จะประสบความสำเร็จในด้านเคมีวิเคราะห์และประยุกต์ แต่วิธีการตรวจวัดวิตามินมา ผลิตภัณฑ์อาหารยังคงต้องใช้แรงงานมากและใช้เวลานาน นี่เป็นเพราะเหตุผลหลายประการ โดยมีสาเหตุหลักดังต่อไปนี้
1. การกำหนดวิตามินจำนวนหนึ่งมักจะซับซ้อนเนื่องจากข้อเท็จจริงที่ว่าวิตามินหลายชนิดพบได้ในธรรมชาติในสภาวะที่ถูกผูกไว้ในรูปแบบของคอมเพล็กซ์ที่มีโปรตีนหรือเปปไทด์รวมถึงในรูปของฟอสฟอรัสเอสเทอร์ สำหรับการพิจารณาเชิงปริมาณ จำเป็นต้องทำลายสารเชิงซ้อนเหล่านี้และแยกวิตามินในรูปแบบอิสระ ซึ่งสามารถเข้าถึงได้สำหรับการวิเคราะห์ทางเคมีกายภาพหรือจุลชีววิทยา โดยปกติจะทำได้โดยใช้สภาวะการประมวลผลแบบพิเศษ (ไฮโดรไลซิสของกรด อัลคาไลน์ หรือเอนไซม์ การนึ่งฆ่าเชื้อ)
2. วิตามินเกือบทั้งหมดเป็นสารประกอบที่ไม่เสถียรมาก เกิดปฏิกิริยาออกซิเดชั่น ไอโซเมอไรเซชัน และการทำลายล้างได้ง่ายภายใต้อิทธิพลของ อุณหภูมิสูงออกซิเจนในอากาศ แสง และปัจจัยอื่นๆ ควรปฏิบัติตามมาตรการป้องกัน: ลดเวลาในการเตรียมผลิตภัณฑ์เบื้องต้นให้มากที่สุด, หลีกเลี่ยงความร้อนแรงและการสัมผัสกับแสง, ใช้สารต้านอนุมูลอิสระ ฯลฯ
3. ตามกฎแล้วในผลิตภัณฑ์อาหาร เราต้องจัดการกับกลุ่มของสารประกอบที่มีความคล้ายคลึงกันทางเคมีอย่างมาก และในขณะเดียวกันก็มีฤทธิ์ทางชีวภาพต่างกัน ตัวอย่างเช่น วิตามินอีประกอบด้วยโทโคฟีรอล 8 ชนิด ซึ่งมีคุณสมบัติทางเคมีคล้ายคลึงกัน แต่มีผลทางชีวภาพต่างกัน กลุ่มแคโรทีนและเม็ดสีแคโรทีนอยด์ประกอบด้วยสารประกอบมากถึง 80 ชนิด โดยมีเพียง 10 ชนิดเท่านั้นที่มีคุณสมบัติวิตามินในระดับหนึ่งหรืออย่างอื่น
4. วิตามินอยู่ในกลุ่มสารประกอบอินทรีย์ประเภทต่างๆ ดังนั้นปฏิกิริยากลุ่มทั่วไปจึงไม่สามารถเกิดขึ้นได้สำหรับพวกเขาและ วิธีการทั่วไปวิจัย.
5. นอกจากนี้การวิเคราะห์ยังมีความซับซ้อนเนื่องจากมีสารประกอบอยู่ในตัวอย่างทดสอบซึ่งมีปริมาณสูงกว่าปริมาณวิตามินที่กำหนดหลายเท่า (เช่นสเตอรอลและวิตามินดี) เพื่อขจัดข้อผิดพลาดที่อาจเกิดขึ้นในการพิจารณาวิตามินในผลิตภัณฑ์อาหาร สารสกัดมักจะถูกทำให้บริสุทธิ์อย่างทั่วถึงจากสารประกอบที่มาพร้อมกันและมีวิตามินเข้มข้น สำหรับสิ่งนี้พวกเขาใช้ เทคนิคต่างๆ: การตกตะกอนของสารที่รบกวนการวิเคราะห์ วิธีการดูดซับ การแลกเปลี่ยนไอออนหรือการแบ่งส่วนโครมาโทกราฟี การเลือกแยกส่วนประกอบที่กำหนด ฯลฯ
ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา วิธี HPLC ประสบความสำเร็จในการตรวจหาวิตามินในผลิตภัณฑ์อาหาร วิธีนี้เป็นวิธีที่มีแนวโน้มมากที่สุด เนื่องจากช่วยให้สามารถแยก ระบุ และกำหนดปริมาณของวิตามินต่างๆ และทางชีวภาพไปพร้อมๆ กัน แบบฟอร์มที่ใช้งานอยู่ซึ่งช่วยลดเวลาในการวิเคราะห์
วิธีทางเคมีกายภาพในการศึกษาวิตามิน วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการใช้คุณสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ของวิตามิน (ความสามารถในการเรืองแสง, การดูดกลืนแสง, ปฏิกิริยารีดอกซ์ ฯลฯ ) ต้องขอบคุณการพัฒนาด้านเคมีวิเคราะห์และวิศวกรรมเครื่องมือ วิธีการทางเคมีกายภาพจึงเข้ามาแทนที่วิธีทางชีววิทยาที่ใช้เวลานานและมีราคาแพงเกือบทั้งหมดโดยสิ้นเชิง
การกำหนดวิตามินซี วิตามินซี (กรดแอสคอร์บิก) สามารถพบได้ในอาหารทั้งในรูปแบบรีดิวซ์และออกซิไดซ์ กรดดีไฮโดรแอสคอร์บิก (DAA) สามารถเกิดขึ้นได้ในระหว่างการแปรรูปและการเก็บรักษาอาหารอันเป็นผลมาจากการเกิดออกซิเดชัน ซึ่งจำเป็นต้องมีการตรวจสอบ เมื่อพิจารณาวิตามินซีในผลิตภัณฑ์อาหารให้ใช้ วิธีการต่างๆ: วิธีการวิเคราะห์ด้วยการวัดสี ฟลูออเรสเซนต์ และปริมาตรตามคุณสมบัติรีดอกซ์ของ AA และ HPLC
จุดสำคัญในการกำหนดปริมาณ AA คือการเตรียมสารสกัดตัวอย่าง การสกัดจะต้องเสร็จสมบูรณ์ สารสกัดที่ดีที่สุดคือสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริก 6% ซึ่งมีความสามารถในการตกตะกอนโปรตีน นอกจากนี้ยังใช้กรดอะซิติกออกซาลิกและไฮโดรคลอริกรวมถึงของผสมด้วย
1. สำหรับการระบุ AA ในรูปแบบออกซิไดซ์และรีดิวซ์ทั้งหมดและแบบแยกกัน มักใช้วิธี Roe ที่ใช้รีเอเจนต์ 2,4-ไดไนโตรฟีนิลไฮดราซีน AA (กรดกูโลนิก) ภายใต้อิทธิพลของสารออกซิไดซ์จะเปลี่ยนเป็น DAC จากนั้นเป็นกรด 2,3-diketoguonic ซึ่งสร้างสารประกอบสีส้มด้วย 2,4-dinitrophenylhydrazine 2,4-Dinitrophenylhydrazine นั้นเป็นเบสที่ไม่สามารถอยู่ในรูปของกรดได้ อย่างไรก็ตามไฮดราโซนที่เกี่ยวข้องภายใต้อิทธิพลของอัลคาลิสจะเปลี่ยนเป็นเกลืออะซิที่มีสีเข้มข้น เมื่อพิจารณาวิตามินซีด้วยวิธีนี้ การมีอยู่ของสารรีดิวซ์ (กลูโคส ฟรุกโตส ฯลฯ ) จะรบกวน ดังนั้นเมื่อมีปริมาณน้ำตาลสูงในผลิตภัณฑ์ภายใต้การศึกษา จะใช้โครมาโทกราฟี ซึ่งทำให้การพิจารณามีความซับซ้อนมากขึ้น
2. ใน เมื่อเร็วๆ นี้ในการพิจารณาปริมาณวิตามินซีทั้งหมด (ผลรวมของ AA และ DAC) วิธีการเรืองแสงที่มีความไวสูงและแม่นยำได้รับการยอมรับ AIBN ควบแน่นกับ o-phenylenediamine เพื่อสร้างสารประกอบเรืองแสง quinoxaline ซึ่งแสดงการเรืองแสงสูงสุดที่ความยาวคลื่นแสงที่น่าตื่นเต้นที่ 350 นาโนเมตร
ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ของควินอกซาลีนในสภาพแวดล้อมที่เป็นกลางที่อุณหภูมิห้องเป็นสัดส่วนโดยตรงกับความเข้มข้นของ AIBN ในการหาปริมาณ AA จะถูกออกซิไดซ์ครั้งแรกใน AIBN ข้อเสียของวิธีนี้คืออุปกรณ์มีราคาค่อนข้างแพง
วิธีการขึ้นอยู่กับคุณสมบัติรีดอกซ์ของ AA
3. จากวิธีการที่ใช้คุณสมบัติรีดอกซ์ของ AA แอปพลิเคชั่นที่ยิ่งใหญ่ที่สุดพบวิธีการไตเตรทด้วยสารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol ซึ่งมีสีฟ้า ผลคูณของปฏิกิริยาระหว่าง AA กับรีเอเจนต์ไม่มีสี วิธีนี้สามารถนำไปใช้ในการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ได้ทุกประเภท เมื่อวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ที่ไม่มีเม็ดสีตามธรรมชาติ เช่น มันฝรั่งและนม จะใช้การไทเทรตด้วยภาพ ในกรณีที่มีสีย้อมธรรมชาติ จะใช้วิธีไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกหรือวิธีสกัดอินโดฟีนอล-ไซลีน วิธีหลังขึ้นอยู่กับการลดสีเชิงปริมาณของ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอลด้วยกรดแอสคอร์บิก สีย้อมส่วนเกินจะถูกสกัดด้วยไซลีน และวัดความหนาแน่นเชิงแสงของสารสกัดที่ 500 นาโนเมตร
มีเพียง AK เท่านั้นที่ตอบสนอง DAC จะลดลงเบื้องต้นด้วยซิสเทอีน หากต้องการแยก AA ออกจากสารรีดิวซ์ที่มีอยู่ในอาหารที่ปรุงสุกหรือเก็บไว้เป็นเวลานาน สารสกัดจะได้รับการบำบัดด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ ฟอร์มาลดีไฮด์ขึ้นอยู่กับ pH ของสภาพแวดล้อมโดยเลือกทำปฏิกิริยากับ AA และสารรีดิวซ์จากสิ่งเจือปนจากต่างประเทศ (pH = 0) เมื่อใช้วิธีนี้ จะกำหนดผลรวมของ AK และ DAC
2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอลยังสามารถใช้สำหรับการตรวจวัดโฟโตเมตริกของ AA ได้อีกด้วย สารละลายรีเอเจนต์จะมีสีน้ำเงิน และผลิตภัณฑ์ที่ทำปฏิกิริยากับ AA จะไม่มีสี เช่น จากปฏิกิริยานี้ ความเข้มของสีน้ำเงินจะลดลง ความหนาแน่นของแสงวัดที่ 605 นาโนเมตร (pH = 3.6)
4. อีกวิธีหนึ่งที่ใช้คุณสมบัติรีดิวซ์ของ AA คือวิธีวัดสี ซึ่งใช้ความสามารถของ AA ในการลด Fe(3+) ให้เป็น Fe(2+) และความสามารถของ AA ในการสร้างเกลือสีแดงเข้มข้นด้วย 2,2 '-ไดไพริดิล. ปฏิกิริยาดำเนินการที่ pH 3.6 และอุณหภูมิ 70°C ความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายวัดที่ 510 นาโนเมตร
5. วิธีโฟโตเมตริกโดยอาศัยอันตรกิริยาของ AA กับรีเอเจนต์ของโฟลิน รีเอเจนต์ของ Folin เป็นส่วนผสมของกรดฟอสโฟโมลิบดิกและฟอสโฟทังสติกเช่น นี่เป็นวิธีการที่รู้จักกันดีโดยอาศัยการก่อตัวของโมลิบดีนัมบลู โดยดูดซับที่ 640–700 นาโนเมตร
6. วิธี HPLC ที่มีความไวสูงและจำเพาะเจาะจงสามารถใช้เพื่อตรวจวัดวิตามินซีในอาหารทุกประเภทได้สำเร็จ การวิเคราะห์ค่อนข้างง่ายเฉพาะเมื่อวิเคราะห์อาหารที่อุดมไปด้วยโปรตีนเท่านั้นจึงจำเป็นต้องลบออกก่อน การตรวจจับทำได้โดยการเรืองแสง
นอกจากวิธีการข้างต้นในการพิจารณาวิตามินซีแล้ว ยังมีวิธีอื่นๆ อีกจำนวนหนึ่ง เช่น ออกซิเดชันกับโกลด์คลอไรด์ และการก่อตัวของกรดไฮดรอกซามิก แต่วิธีการเหล่านี้ไม่มีความสำคัญในทางปฏิบัติ
การหาปริมาณไทอามีน (B 1 ). ในผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติส่วนใหญ่ ไทอามีนพบได้ในรูปของไดฟอสฟอรัสเอสเทอร์ - โคคาร์บอกซิเลส หลังเป็นกลุ่มที่ใช้งานของเอนไซม์การเผาผลาญคาร์โบไฮเดรตจำนวนหนึ่งอยู่ในพันธะบางอย่างกับโปรตีน ในการกำหนดไทอามีนในเชิงปริมาณจำเป็นต้องทำลายคอมเพล็กซ์และแยกวิตามินที่อยู่ระหว่างการศึกษาในรูปแบบอิสระซึ่งสามารถเข้าถึงได้ทางกายภาพ การวิเคราะห์ทางเคมี. เพื่อจุดประสงค์นี้จะดำเนินการไฮโดรไลซิสของกรดหรือการไฮโดรไลซิสภายใต้อิทธิพลของเอนไซม์ วัตถุที่มีโปรตีนสูงจะได้รับการบำบัดด้วยเอนไซม์โปรตีโอไลติก (เปปซิน) ในกรดไฮโดรคลอริก วัตถุด้วย เนื้อหาสูงไขมัน (หมู, ชีส) เพื่อเอาออกพวกมันจะถูกบำบัดด้วยอีเทอร์ (ไทอามีนแทบไม่ละลายในอีเทอร์)
1. ในการตรวจสอบไทอามีนในผลิตภัณฑ์อาหาร มักจะใช้วิธีการเรืองแสง โดยอาศัยการออกซิเดชันของไทอามีนในตัวกลางที่เป็นด่างที่มีโพแทสเซียมเฮกซาไซยาโนเฟอร์เรต (3+) เพื่อสร้างสารประกอบไทโอโครมที่เรืองแสงอย่างรุนแรงในแสงอัลตราไวโอเลต ความเข้มของการเรืองแสงเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณไทอามีน (ความยาวคลื่นของแสงที่น่าตื่นเต้นคือ 365 นาโนเมตร แสงที่ปล่อยออกมาคือ 460–470 นาโนเมตร (เรืองแสงสีน้ำเงิน)) เมื่อใช้วิธีนี้ จะเกิดปัญหาขึ้นเนื่องจากวัตถุจำนวนหนึ่งมีสารประกอบเรืองแสง สิ่งเหล่านี้จะถูกกำจัดออกโดยการทำให้บริสุทธิ์บนคอลัมน์ที่มีเรซินแลกเปลี่ยนไอออน เมื่อวิเคราะห์เนื้อสัตว์ นม มันฝรั่ง ขนมปังโฮลวีต และผักบางชนิด ไม่จำเป็นต้องทำความสะอาด
2. ไทอามีนมีลักษณะพิเศษคือการดูดซับของตัวเองในบริเวณรังสียูวี (240 นาโนเมตร - นิ้ว สารละลายที่เป็นน้ำ, 235 นาโนเมตร – ในเอทานอล) ซึ่งหมายความว่าสามารถกำหนดได้โดยสเปกโตรโฟโตเมทรีโดยตรง
3. HPLC ใช้สำหรับการตรวจวัดไทอามีนและไรโบฟลาวินพร้อมกัน
ความมุ่งมั่นของไรโบฟลาวิน (B 2 ). ในอาหาร ไรโบฟลาวินส่วนใหญ่อยู่ในรูปของฟอสฟอรัสเอสเทอร์ที่จับกับโปรตีน ดังนั้นจึงไม่สามารถระบุได้หากไม่มีการย่อยโปรตีนก่อน ไรโบฟลาวินฟรีพบได้ในนมในปริมาณมาก
เมื่อพิจารณาไรโบฟลาวิน การกระจายตัวที่ยิ่งใหญ่ที่สุดได้รับวิธีวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาและเคมีกายภาพ (ฟลูออเรสเซนต์) วิธีการทางจุลชีววิทยามีความเฉพาะเจาะจง มีความไวสูงและแม่นยำ ใช้ได้กับทุกผลิตภัณฑ์แต่ติดทนนานและต้องมีเงื่อนไขพิเศษ
วิธีเคมีฟิสิกส์ได้รับการพัฒนาในสองเวอร์ชัน ซึ่งแตกต่างกันในวิธีประเมินสารเรืองแสง:
ตัวเลือกการเรืองแสงโดยตรง (การกำหนดความเข้มของการเรืองแสงของไรโบฟลาวิน) และ
· ตัวแปรลูมิฟลาวีน
1. ไรโบฟลาวินอิสระและฟอสฟอรัสเอสเทอร์มีลักษณะการเรืองแสงสีเหลืองเขียวที่ความยาวคลื่นแสงกระตุ้น 440–500 นาโนเมตร วิธีการเรืองแสงที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจหาไรโบฟลาวินนั้นขึ้นอยู่กับคุณสมบัตินี้ ไรโบฟลาวินและเอสเทอร์ให้สเปกตรัมเรืองแสงที่คล้ายกันมาก โดยมีค่าสูงสุดที่ 530 นาโนเมตร ตำแหน่งสูงสุดไม่ได้ขึ้นอยู่กับ pH ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ขึ้นอยู่กับ pH และตัวทำละลายอย่างมีนัยสำคัญ (ต่างกันสำหรับไรโบฟลาวินและเอสเทอร์) ดังนั้นเอสเทอร์จะถูกทำลายในขั้นแรกและไรโบฟลาวินอิสระจะถูกวิเคราะห์ เพื่อจุดประสงค์นี้ มีการใช้ไฮโดรไลซิสด้วยกรดไฮโดรคลอริกและกรดไตรคลอโรอะซิติก การนึ่งฆ่าเชื้อ และการบำบัดด้วยการเตรียมเอนไซม์
ความเข้มของการเรืองแสงสีเหลืองเขียวของไรโบฟลาวินในแสง UV ไม่เพียงแต่ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นเท่านั้น แต่ยังขึ้นอยู่กับค่า pH ของสารละลายด้วย ความเข้มข้นสูงสุดสามารถทำได้ที่ pH=6-7 อย่างไรก็ตาม การวัดจะดำเนินการที่ pH ตั้งแต่ 3 ถึง 5 เนื่องจากในช่วงนี้ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์จะถูกกำหนดโดยความเข้มข้นของไรโบฟลาวินเท่านั้นและไม่ขึ้นอยู่กับปัจจัยอื่น ๆ - ค่า pH ความเข้มข้นของเกลือ เหล็ก สิ่งเจือปนอินทรีย์ ฯลฯ .
ไรโบฟลาวินถูกทำลายได้ง่ายในแสง การตรวจวัดจะดำเนินการในสถานที่ที่ป้องกันจากแสงและที่ pH ไม่สูงกว่า 7 ควรสังเกตว่าวิธีการเรืองแสงโดยตรงไม่สามารถใช้ได้กับผลิตภัณฑ์ที่มีปริมาณไรโบฟลาวินต่ำ
2. ตัวแปรลูมิฟลาวินขึ้นอยู่กับการใช้คุณสมบัติของไรโบฟลาวินเมื่อถูกฉายรังสีในตัวกลางที่เป็นด่าง เพื่อเปลี่ยนเป็นลูมิฟลาวิน ซึ่งวัดความเข้มของการเรืองแสงได้หลังจากการสกัดด้วยคลอโรฟอร์ม (ฟลูออเรสเซนต์สีน้ำเงิน 460–470 นาโนเมตร) เนื่องจากภายใต้เงื่อนไขบางประการ 60–70% ของไรโบฟลาวินทั้งหมดผ่านเข้าสู่ลูมิฟลาวินเมื่อทำการวิเคราะห์จึงจำเป็นต้องสังเกต เงื่อนไขคงที่การฉายรังสีจะเหมือนกันสำหรับการทดสอบและสารละลายมาตรฐาน
ความมุ่งมั่นของวิตามินบี 6 . สามารถใช้วิธีการต่อไปนี้เพื่อกำหนดวิตามิน:
1. สเปกโตรโฟโตมิเตอร์โดยตรง ไพริดอกซิ ไฮโดรคลอไรด์มีลักษณะการดูดซึมของตัวเองที่ 292 นาโนเมตร (e = 4.4 · 10 3) ที่ pH = 5
2. วิธีเจลดาห์ล การหาปริมาณจะดำเนินการโดยแอมโมเนียที่เกิดขึ้นระหว่างการเกิดออกซิเดชันของวิตามิน
3. วิธีโฟโตเมตริกโดยอาศัยปฏิกิริยากับ 2,6-ไดคลอโรควิโนนคลอโรอิมีน (สารกิ๊บส์) ที่ pH 8–10 ซึ่งส่งผลให้เกิดการก่อตัวของอินโดฟีนอลสีน้ำเงิน อินโดฟีนอลถูกสกัดด้วยเมทิลเอทิลคีโตน และความหนาแน่นเชิงแสงของสารสกัดวัดที่ 660–690 นาโนเมตร (ฟีนอลที่มีตำแหน่งพาราอิสระจะให้ปฏิกิริยากิ๊บส์)
4. วิธีการเรืองแสงโดยอาศัยข้อเท็จจริงที่ว่าเมื่อฉายรังสี ไพริดอกซิและไพริดอกซามีนจะแสดงเรืองแสงสีน้ำเงิน และไพริดอกซัลจะแสดงเรืองแสงสีน้ำเงิน
ความมุ่งมั่นของวิตามินบี 9 . การกำหนดโฟเลตในผลิตภัณฑ์อาหารในเนื้อเยื่อและของเหลวในร่างกายทำให้เกิดปัญหาอย่างมาก เนื่องจาก ในวัตถุเหล่านี้มักจะปรากฏอยู่ในรูปแบบที่ถูกผูกไว้ (เป็นโพลีกลูตาเมต) นอกจากนี้ รูปแบบส่วนใหญ่ยังไวต่อผลกระทบของออกซิเจน แสง และอุณหภูมิในชั้นบรรยากาศ เพื่อป้องกันโฟเลตจากการไฮโดรไลซิส แนะนำให้ทำไฮโดรไลซิสต่อหน้า วิตามินซี.
โฟเลตในผลิตภัณฑ์อาหารสามารถกำหนดได้โดยวิธีทางกายภาพ เคมี และจุลชีววิทยา วิธีการวัดสีขึ้นอยู่กับความแตกแยกของกรด pteroylglutamic เพื่อสร้างกรด p-aminobenzoic และสารที่เกี่ยวข้อง และเปลี่ยนเป็นสารประกอบที่มีสีต่อไป อย่างไรก็ตาม เนื่องจากขาดความเฉพาะเจาะจง วิธีการนี้จึงใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรมเป็นหลัก
สำหรับการแยก การทำให้บริสุทธิ์ และการระบุโฟเลต ยังได้พัฒนาวิธีโครมาโตกราฟีบนคอลัมน์ กระดาษ และในชั้นตัวดูดซับบาง ๆ อีกด้วย
การหาปริมาณวิตามิน PP ในผลิตภัณฑ์อาหาร กรดนิโคตินิกและเอไมด์พบได้ทั้งในรูปแบบอิสระและแบบเกาะติด ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของโคเอ็นไซม์ วิธีการทางเคมีและจุลชีววิทยาในการวัดปริมาณไนอาซินเกี่ยวข้องกับการแยกและการเปลี่ยนแปลงที่สมบูรณ์ที่สุด แบบฟอร์มที่เกี่ยวข้องซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของอินทรียวัตถุที่ซับซ้อนของเซลล์กลายเป็นกรดนิโคตินิกอิสระ ไนอาซินในรูปแบบที่จับตัวกันจะถูกปล่อยออกมาจากการสัมผัสกับสารละลายกรดหรือแคลเซียมไฮดรอกไซด์เมื่อถูกความร้อน การไฮโดรไลซิสด้วยสารละลายกรดซัลฟิวริก 1 M ในหม้อนึ่งความดันเป็นเวลา 30 นาทีที่ความดัน 0.1 MPa ทำให้เกิดการปลดปล่อยไนอาซินในรูปแบบที่ถูกผูกไว้อย่างสมบูรณ์และการเปลี่ยนนิโคตินาไมด์เป็นกรดนิโคตินิก เป็นที่ยอมรับกันว่าวิธีการประมวลผลนี้ผลิตไฮโดรไลเสตที่มีสีน้อยกว่า และสามารถนำมาใช้ในการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์จากเนื้อสัตว์และปลาได้ การไฮโดรไลซิสด้วยแคลเซียมไฮดรอกไซด์เป็นวิธีที่นิยมใช้ในการตรวจวัดไนอาซินในแป้ง ธัญพืช ขนมอบ ชีส อาหารเข้มข้น ผัก ผลเบอร์รี่ และผลไม้ Ca(OH) 2 ก่อให้เกิดสารประกอบที่มีน้ำตาลและโพลีแซ็กคาไรด์ เปปไทด์ และไกลโคเปปไทด์ ซึ่งแทบไม่ละลายเลยในสารละลายเย็น เป็นผลให้ไฮโดรไลเสตที่ได้จากการบำบัด Ca(OH) 2 มีสารที่รบกวนการตรวจวัดทางเคมีน้อยกว่ากรดไฮโดรไลเสต
1. วิธีการทางเคมีในการระบุไนอาซินนั้นขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาโคนิกซึ่งเกิดขึ้นในสองขั้นตอน ขั้นแรกคือปฏิกิริยาของปฏิกิริยาของวงแหวนไพริดีน กรดนิโคตินิกกับไซยาโนเจนโบรไมด์ประการที่สองคือการก่อตัวของอนุพันธ์สีของกลูตาโคนิกอัลดีไฮด์อันเป็นผลมาจากอันตรกิริยากับเอมีนอะโรมาติก (ทันทีหลังจากเติมไซยาโนเจนโบรไมด์ลงในกรดนิโคตินิก กลูตาคาลดีไฮด์สีเหลืองจะปรากฏขึ้น อันเป็นผลมาจากการมีปฏิสัมพันธ์กับเอมีนอะโรมาติกที่ใส่เข้าไปในส่วนผสมของปฏิกิริยา ไดอานิลจึงเกิดขึ้นซึ่งมีสีเหลืองส้มหรือแดงอย่างเข้มข้นขึ้นอยู่กับเอมีน (เบนซิดีน - สีแดง , กรดซัลลานิลิก - สีเหลือง)ปฏิกิริยา Koenig ใช้สำหรับการวัดค่าโฟโตเมตริกของไพริดีนและอนุพันธ์ของมันด้วยตำแหน่ง a อิสระ ข้อเสียของวิธีนี้คือระยะเวลาเนื่องจากอัตราการเกิดปฏิกิริยาต่ำ
การได้รับ CNBr สามารถทำได้สองวิธี:
1. CN – + Br 2 = CNBr + Br –
2. SCN – + Br 2 + 4H 2 O = CNBr + SO 4 2– + 8H + + Br –
ปฏิกิริยานี้มีการปรับเปลี่ยนหลายอย่างขึ้นอยู่กับอุณหภูมิ pH และแหล่งที่มาของอะโรมาติกเอมีน ค่า pH และเอมีนมีอิทธิพลอย่างมากต่อความเข้มและความคงตัวของสีที่กำลังพัฒนา สีที่เสถียรที่สุดเกิดจากผลิตภัณฑ์ที่ทำปฏิกิริยาของกรดนิโคตินิกกับรีเอเจนต์บรอมโรเดน (ไซยาโนโบรไมด์) และกรดซัลลานิลิกหรือเมทอล (พารา-เมทิลอะมิโนฟีนอลซัลเฟต)
2. กรดนิโคตินิกและเอไมด์ของกรดนั้นสามารถตรวจวัดด้วยวิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกได้ เนื่องจากการดูดซึมภายในของกรดนิโคตินิกในบริเวณรังสียูวี กรดนิโคตินิกมีลักษณะการดูดซึมสูงสุดที่ 262 นาโนเมตร (E = 4.4 · 10 3) และนิโคตินาไมด์ที่ 215 นาโนเมตร (E = 9 10 3)
3. วิธีการทางจุลชีววิทยาใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจวัดปริมาณไนอาซิน เป็นเรื่องง่าย เฉพาะเจาะจง แต่ยาวนานกว่าสารเคมี วิธีทางจุลชีววิทยาช่วยให้คุณสามารถระบุปริมาณไนอาซินในวัตถุที่ไม่สามารถทำได้ทางเคมี (ผลิตภัณฑ์ที่มีปริมาณน้ำตาลสูงและมีระดับไนอาซินต่ำ)
การหาปริมาณบีแคโรทีน. ในผลิตภัณฑ์อาหารหลายชนิดโดยเฉพาะ ต้นกำเนิดของพืชมีสารที่เรียกว่าแคโรทีนอยด์อยู่ด้วย แคโรทีนอยด์ (จาก lat. คาโรต้า– แครอท) – เม็ดสีธรรมชาติจากสีเหลืองเป็นสีส้มแดง สารประกอบไม่อิ่มตัวเชิงซ้อนที่มีวงแหวนไซโคลเฮกเซน ในกรณีส่วนใหญ่จะมีคาร์บอน 40 อะตอมต่อโมเลกุล) บางส่วน (ก, บี-แคโรทีน, คริปโตแซนธิน ฯลฯ) เป็นโปรวิตามิน (สารตั้งต้น) ของวิตามินเอ เนื่องจากสามารถเปลี่ยนเป็นวิตามินเอในร่างกายมนุษย์และสัตว์ได้ โพรวิตามินเอรู้จักประมาณสิบชนิด แต่ที่ออกฤทธิ์มากที่สุดคือบีแคโรทีน
เมื่อวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์อาหาร จำเป็นต้องมีการบำบัดตัวอย่างล่วงหน้าเพื่อสกัด ทำให้แคโรทีนเข้มข้น และทำให้บริสุทธิ์จากสารประกอบที่เกี่ยวข้อง เพื่อจุดประสงค์เหล่านี้ มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการสกัด (ปิโตรเลียมอีเทอร์ เฮกเซน อะซิโตน และของผสม) ซาพอนิฟิเคชัน และโครมาโทกราฟี เมื่อพิจารณาหาวิตามินบีแคโรทีน ควรหลีกเลี่ยงการให้ความร้อน แต่ในบางกรณี จำเป็นต้องมีการสะพอนิฟิเคชันแบบร้อน เช่น เมื่ออัตราส่วนของไขมันต่อบีแคโรทีนมากกว่า 1,000:1 (ผลิตภัณฑ์จากนม ไขมันสัตว์ มาการีน ไข่ ตับ) การสะพอนิฟิเคชันจะดำเนินการเมื่อมีสารต้านอนุมูลอิสระ อัลคาไลส่วนเกินนำไปสู่การทำลายบีแคโรทีน ในการแยกบีแคโรทีนออกจากเม็ดสีที่มาพร้อมกัน มีการใช้โครมาโตกราฟีแบบดูดซับบนคอลัมน์ที่มีอะลูมิเนียมออกไซด์และแมกนีเซียมอย่างกว้างขวาง
1. วิธีเคมีกายภาพที่ใช้ในปัจจุบันส่วนใหญ่ในการหาวิตามินบีแคโรทีนในผลิตภัณฑ์อาหารนั้นขึ้นอยู่กับการวัดความเข้มของการดูดกลืนแสงของสารละลาย เนื่องจากสารประกอบที่มีพันธะคู่แบบคอนจูเกต แคโรทีนอยด์จึงมีสเปกตรัมการดูดกลืนแสงที่มีลักษณะเฉพาะในรังสียูวีและบริเวณที่มองเห็นได้ ตำแหน่งของแถบดูดซับขึ้นอยู่กับจำนวนของพันธะคู่คอนจูเกตในโมเลกุลแคโรทีนอยด์และตัวทำละลายที่ใช้ การดูดซึมบีแคโรทีนสูงสุดพบได้ในเบนซีนที่ 464-465 นาโนเมตร ในเฮกเซนและปิโตรเลียมอีเทอร์ที่ 450-451 นาโนเมตร
2. เมื่อเร็ว ๆ นี้วิธี HPLC ถูกนำมาใช้บ่อยมากขึ้นในการหาวิตามินบีแคโรทีนและแคโรทีนอยด์อื่น ๆ วิธีนี้ช่วยให้คุณลดเวลาในการวิเคราะห์และโอกาสที่จะถูกทำลายภายใต้อิทธิพลของแสงและออกซิเจน วิธี HPLC ของแคโรทีนอยด์เป็นตัวอย่างคลาสสิกของการสาธิตความสามารถของวิธีการในการแยกและหาปริมาณไอโซเมอร์เชิงพื้นที่ของ a- และ b-แคโรทีนในผัก
ในการกำหนดบีแคโรทีน อาจใช้วิธีการทางเคมีได้ เช่น โดยอิงจากปฏิกิริยากับพลวงคลอไรด์ (3+) ในคลอโรฟอร์ม (สีน้ำเงิน 590 นาโนเมตร) คล้ายกับวิตามินเอ และกับรีเอเจนต์ของโฟลิน (สีน้ำเงิน 640– 700 นาโนเมตร) อย่างไรก็ตาม เนื่องจากปฏิกิริยาเหล่านี้ไม่จำเพาะเจาะจง จึงไม่พบการใช้อย่างแพร่หลาย
ความมุ่งมั่นของวิตามินเอ ตัวแทนที่สำคัญที่สุดของวิตามินคือเรตินอล (A 1 - แอลกอฮอล์), เรตินอล (A 1 - อัลดีไฮด์), กรดเรติโนอิก (A 2) ดังที่ได้กล่าวไปแล้ว
ในการวัดปริมาณวิตามินเอในผลิตภัณฑ์อาหาร จะใช้วิธีการต่างๆ มากมาย: การวัดสี ฟลูออเรสเซนต์ ไดเร็กสเปกโทรสโกปี และ HPLC การเลือกวิธีการจะขึ้นอยู่กับความพร้อมของอุปกรณ์นั้น วัตถุประสงค์ของการศึกษา คุณสมบัติของวัสดุที่กำลังวิเคราะห์ ปริมาณวิตามินเอที่คาดหวัง และลักษณะของสิ่งเจือปนที่มาพร้อมกัน
การแยกวิตามินทำได้โดยการต้มด้วย สารละลายแอลกอฮอล์ KOH ในสภาพแวดล้อมไนโตรเจน และต่อมาสกัดด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์
1. สำหรับการตรวจวัดเชิงปริมาณของสารที่มีฤทธิ์ของวิตามินเอ สามารถใช้วิธีไดเร็กสเปกโตรโฟโตเมทรีได้ โดยขึ้นอยู่กับความสามารถของสารประกอบเหล่านี้ในการเลือกดูดซับแสงที่ความยาวคลื่นต่างๆ ในบริเวณ UV ของสเปกตรัม การดูดซึมจะเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของสารเมื่อวัดที่ความยาวคลื่น โดยสังเกตลักษณะเฉพาะสูงสุดของการดูดซึมของสารประกอบที่กำหนดในตัวทำละลายที่ใช้ วิธีนี้เป็นวิธีที่ง่ายที่สุด เร็วที่สุด และค่อนข้างเฉพาะเจาะจง ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้เมื่อพิจารณาวิตามินเอในวัตถุที่ไม่มีสิ่งเจือปนและมีการดูดซึมในบริเวณเดียวกันของสเปกตรัม หากมีสิ่งเจือปนดังกล่าว สามารถใช้ร่วมกับขั้นตอนการแยกโครมาโตกราฟีได้
2. วิธีการเรืองแสงที่มีแนวโน้มนั้นขึ้นอยู่กับความสามารถของเรตินอลในการเรืองแสงภายใต้อิทธิพลของรังสียูวี (ความยาวคลื่นแสงที่น่าตื่นเต้น 330–360 นาโนเมตร) การเรืองแสงสูงสุดจะสังเกตได้ในพื้นที่ 480 นาโนเมตร การกำหนดวิตามินเอด้วยวิธีนี้ถูกรบกวนโดยแคโรทีนอยด์และวิตามินดี เพื่อกำจัดผลกระทบจากการรบกวนจึงใช้โครมาโตกราฟีบนอะลูมิเนียมออกไซด์ ข้อเสียของวิธีฟลูออเรสเซนต์คืออุปกรณ์ราคาแพง
3. ก่อนหน้านี้ วิธีการวัดสีที่ใช้กันทั่วไปในการหาวิตามินเอคือปฏิกิริยากับพลวงคลอไรด์ ใช้สารละลายพลวงคลอไรด์ในคลอโรฟอร์ม (รีเอเจนต์ Carr-Price) กลไกการเกิดปฏิกิริยายังไม่ได้รับการจัดตั้งขึ้นอย่างแม่นยำ และสันนิษฐานว่าปฏิกิริยาเกี่ยวข้องกับการผสมของ SbCL 5 ใน SbCl 3 สารประกอบที่เกิดขึ้นจากปฏิกิริยาจะมีสีฟ้า การวัดความหนาแน่นของแสงจะดำเนินการที่ความยาวคลื่น 620 นาโนเมตรเป็นเวลา 3–5 วินาที ข้อเสียที่สำคัญของวิธีนี้คือความไม่เสถียรของสีที่กำลังพัฒนาตลอดจนความสามารถในการไฮโดรไลซ์ของ SbCl 3 สูง ปฏิกิริยาจะถือว่าดำเนินการดังต่อไปนี้:
ปฏิกิริยานี้ไม่เฉพาะเจาะจงสำหรับวิตามินเอ แคโรทีนอยด์ให้สีที่คล้ายกัน แต่การแยกโครมาโตกราฟีของสารประกอบเหล่านี้ทำให้สามารถกำจัดอิทธิพลที่รบกวนได้
การตรวจวัดวิตามินเอตามวิธีการที่ระบุไว้มักจะต้องผ่านขั้นตอนการเตรียมการก่อน ซึ่งรวมถึงการไฮโดรไลซิสที่เป็นด่างของสารคล้ายไขมัน และการสกัดสารตกค้างที่ไม่สามารถสปอนนิฟายได้ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ บ่อยครั้งที่จำเป็นต้องดำเนินการแยกโครมาโตกราฟีของสารสกัด
4. เมื่อเร็ว ๆ นี้แทนที่จะใช้คอลัมน์โครมาโทกราฟีมากขึ้นเรื่อย ๆ ประยุกต์กว้าง HPLC ซึ่งช่วยให้สามารถแยกวิตามินที่ละลายในไขมัน (A, D, E, K) ซึ่งมักจะปรากฏพร้อมๆ กันในอาหาร และวัดปริมาณได้อย่างแม่นยำมาก HPLC ช่วยให้ตรวจวัดวิตามินรูปแบบต่างๆ ได้ง่ายขึ้น (วิตามินเอแอลกอฮอล์ ไอโซเมอร์ เรตินอลเอสเทอร์) ซึ่งมีความจำเป็นอย่างยิ่งในการตรวจสอบการเติมวิตามินในผลิตภัณฑ์อาหาร
ความมุ่งมั่นของวิตามินอี. กลุ่มของสารภายใต้ชื่อทั่วไปว่า "วิตามินอี" รวมถึงอนุพันธ์ของโทคอลและไทรอีนอล ซึ่งมีฤทธิ์ทางชีวภาพของเอ-โทโคฟีรอล นอกจากเอ-โทโคฟีรอลแล้ว ยังรู้จักสารประกอบที่เกี่ยวข้องกับฤทธิ์ทางชีวภาพอีก 7 ชนิดอีกด้วย ทั้งหมดนี้สามารถพบได้ในผลิตภัณฑ์ ดังนั้นปัญหาหลักในการวิเคราะห์วิตามินอีคือในหลายกรณีจำเป็นต้องพิจารณากลุ่มของสารประกอบที่มีความคล้ายคลึงกันทางเคมีมาก แต่ในขณะเดียวกันก็มีฤทธิ์ทางชีวภาพที่แตกต่างกันซึ่งสามารถประเมินได้โดยวิธีทางชีวภาพเท่านั้น นี่เป็นเรื่องยากและมีราคาแพง ดังนั้นวิธีการทางเคมีกายภาพจึงเข้ามาแทนที่วิธีทางชีววิทยาเกือบทั้งหมด
ขั้นตอนหลักของการตรวจวัดวิตามินอี: การเตรียมตัวอย่าง, การไฮโดรไลซิสแบบอัลคาไลน์ (ซาพอนิฟิเคชั่น), การสกัดสารตกค้างที่ไม่สามารถละลายได้ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์, การแยกวิตามินอีออกจากสารที่รบกวนการวิเคราะห์และการแยกโทโคฟีรอลโดยใช้โครมาโตกราฟีประเภทต่างๆ, การกำหนดเชิงปริมาณ โทโคฟีรอลมีความไวต่อการเกิดออกซิเดชันมากในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่าง ดังนั้นการสะพอนิฟิเคชันและการสกัดจึงดำเนินการในบรรยากาศไนโตรเจนและมีสารต้านอนุมูลอิสระ (กรดแอสคอร์บิก) การสะพอนิฟิเคชันอาจทำลายรูปแบบที่ไม่อิ่มตัว (โทโคไตรอีนอล) ดังนั้นหากจำเป็นต้องตรวจสอบวิตามินอีทุกรูปแบบที่มีอยู่ในผลิตภัณฑ์ การทำซาพอนิฟิเคชั่นจะถูกแทนที่ด้วยกระบวนการอื่น ๆ เช่น การตกผลึกที่อุณหภูมิต่ำ
1. วิธีการทางเคมีกายภาพส่วนใหญ่ในการหาวิตามินอีนั้นขึ้นอยู่กับการใช้คุณสมบัติรีดอกซ์ของโทโคฟีรอล ในการกำหนดปริมาณโทโคฟีรอลในผลิตภัณฑ์อาหาร ปฏิกิริยาที่ใช้บ่อยที่สุดคือการลดเฟอร์ริกเหล็กให้เป็นเหล็กไดวาเลนต์โดยโทโคฟีรอลจนเกิดเป็นสารเชิงซ้อน Fe(2+) ที่มีสีด้วยรีเอเจนต์อินทรีย์ ที่ใช้กันมากที่สุดคือ 2,2'-ไดไพริดิล โดยที่ Fe(2+) ให้สารเชิงซ้อนสีแดง (สูงสุด = 500 นาโนเมตร) ปฏิกิริยาไม่เฉพาะเจาะจง อีกทั้งยังประกอบด้วยแคโรทีน สไตรีน วิตามินเอ ฯลฯ นอกจากนี้ ความเข้มของสียังขึ้นอยู่กับเวลา อุณหภูมิ และแสงสว่างอย่างมาก ดังนั้น เพื่อเพิ่มความแม่นยำในการวิเคราะห์ อันดับแรกโทโคฟีรอลจะถูกแยกออกจากสารประกอบที่รบกวนการกำหนดโดยใช้คอลัมน์ โครมาโทกราฟีแบบแก๊ส-ของเหลว หรือ HPLC เมื่อพิจารณามูลค่าวิตามินอีของผลิตภัณฑ์ซึ่งมีเอ-โทโคฟีรอลคิดเป็นมากกว่า 80% ของปริมาณโทโคฟีรอลทั้งหมด (เนื้อสัตว์ ผลิตภัณฑ์จากนม ปลา ฯลฯ) มักจะจำกัดอยู่ที่การกำหนดปริมาณโทโคฟีรอลเท่านั้น เมื่อมีโทโคฟีรอลอื่นๆ (น้ำมันพืช ธัญพืช ขนมอบ ถั่ว) ในปริมาณที่มีนัยสำคัญ คอลัมน์โครมาโทกราฟีจะถูกนำมาใช้เพื่อแยกโทโคฟีรอลเหล่านั้น
2. วิธีฟลูออเรสเซนต์สามารถใช้เพื่อกำหนดปริมาณโทโคฟีรอลได้ สารสกัดเฮกเซนมีค่าการเรืองแสงสูงสุดในพื้นที่ 325 นาโนเมตร โดยมีความยาวคลื่นแสงที่น่าตื่นเต้น 292 นาโนเมตร
3. สำหรับการตรวจวัดโทโคฟีรอลแต่ละตัว วิธี HPLC เป็นสิ่งที่น่าสนใจอย่างไม่ต้องสงสัย โดยให้การวิเคราะห์ทั้งแบบแยกและเชิงปริมาณในกระบวนการเดียว วิธีการนี้ยังมีความไวและความแม่นยำสูงอีกด้วย การตรวจจับทำได้โดยการดูดซับหรือการเรืองแสง
ความมุ่งมั่นของวิตามินดี ปริมาณวิตามินในผลิตภัณฑ์เป็นงานที่ยากมากเนื่องจากมีปริมาณน้อย ขาดปฏิกิริยาเฉพาะที่ละเอียดอ่อนต่อวิตามินดี และความยากลำบากในการแยกวิตามินดีออกจากสารที่เกี่ยวข้อง จนกระทั่งเมื่อไม่นานมานี้มีการใช้การศึกษาทางชีววิทยาเกี่ยวกับหนูหรือไก่ วิธีการทางชีวภาพขึ้นอยู่กับการกำหนดจำนวนขั้นต่ำของผลิตภัณฑ์ทดสอบที่ใช้รักษาหรือป้องกันโรคกระดูกอ่อนในหนู (ไก่) จากการรับประทานอาหารที่ทำให้เกิดโรคกระดูกอ่อน ระดับของโรคกระดูกอ่อนได้รับการประเมินด้วยภาพรังสี นี่ค่อนข้างเฉพาะเจาะจงและ วิธีการที่แน่นอนโดยให้ตรวจวัดวิตามินดีที่ความเข้มข้น 0.01–0.2 ไมโครกรัม%
1. เมื่อศึกษาผลิตภัณฑ์ที่มีปริมาณวิตามินดีมากกว่า 1 ไมโครกรัม% สามารถใช้วิธีโฟโตเมตริกได้โดยอาศัยปฏิกิริยาของแคลซิเฟอรอลกับพลวงคลอไรด์ (ผลิตภัณฑ์ที่มีสีใน สีชมพู). วิธีการนี้สามารถตรวจวัดทั้งคลอเลแคลซิเฟอรอล (D 3) และเออร์โกแคลซิเฟอรอล (D 2) การวิเคราะห์ประกอบด้วยการดำเนินการต่อไปนี้: ปฏิกิริยาซาพอนิฟิเคชัน (อัลคาไลน์ไฮโดรไลซิส) การตกตะกอนของสเตอรอล โครมาโตกราฟี (คอลัมน์หรือฉากกั้น) และปฏิกิริยาโฟโตเมตริกกับพลวงคลอไรด์ วิธีนี้เหมาะสำหรับการตรวจวัดปริมาณวิตามินดีใน น้ำมันปลา, ไข่, ตับปลา, คาเวียร์, เนย,อาหารที่อุดมด้วยวิตามิน วิธีการที่อธิบายไว้นั้นใช้แรงงานเข้มข้นและใช้เวลานาน
วิตามินดี2 ต้องได้รับการปกป้องจากแสงและอากาศ ไม่เช่นนั้นจะเกิดไอโซเมอไรเซชัน D 3 – มีเสถียรภาพมากขึ้น
2. เร็วขึ้น เชื่อถือได้มากขึ้น และแม่นยำยิ่งขึ้นคือวิธี HPLC ที่ใช้กันมากขึ้น ซึ่งประสบความสำเร็จในการวิเคราะห์เด็กและ ผลิตภัณฑ์อาหารอุดมด้วยวิตามินดี
3. แคลซิเฟอรอลมีลักษณะพิเศษคือการดูดซับรังสียูวีในตัวและสามารถกำหนดได้โดยการวัดสเปกโตรโฟโตมิเตอร์โดยตรง
ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา วิธีการแยกโครมาโทกราฟี โดยเฉพาะโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางและแก๊ส-ของเหลว ได้ถูกนำมาใช้อย่างประสบความสำเร็จในการหาวิตามินดี ในการศึกษาทดลอง วิธีเคมีกัมมันตภาพรังสีร่วมกับโครมาโทกราฟีแบบชั้นบางหรือคอลัมน์บนซิลิกาเจลหรืออะลูมิเนียมออกไซด์ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อศึกษาการเผาผลาญของวิตามินดีในสัตว์และมนุษย์
ความมุ่งมั่นของวิตามินเค ในการตรวจสอบวิตามินเค จะใช้วิธีการทางกายภาพ เคมี ชีวภาพ รวมถึงวิธีสเปกโตรกราฟีโดยพิจารณาจากความไวของวิตามินเคต่อรังสียูวี
สำหรับการตรวจหา 2-methyl-1,4-naphthoquinones มีการเสนอวิธีการวัดสีหลายวิธี โดยขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาสีที่พวกเขาให้กับรีเอเจนต์จำนวนหนึ่ง: 2,4-dinitrophenylhydrazine, N,N-sodium diethyldithiocarbamate, เกลือเตตราโซเลียม ฯลฯ แต่วิธีการทั้งหมดนี้และวิธีการทางกายภาพและเคมีอื่นๆ จำนวนหนึ่งไม่ได้มีความเฉพาะเจาะจงเพียงพอ และผลลัพธ์ที่ได้รับจากความช่วยเหลือเหล่านี้มีคุณค่าที่สัมพันธ์กันอย่างมากในการพิจารณาปริมาณวิตามินเคในผลิตภัณฑ์อาหาร อวัยวะ และเนื้อเยื่อของมนุษย์และสัตว์ ผลลัพธ์ที่น่าพึงพอใจได้จากวิธีการวัดสีและสเปกโตรโฟโตเมตริกร่วมกับโครมาโทกราฟี การทำให้บริสุทธิ์ และการแยกวิตามินเคบนคอลัมน์ บนกระดาษ หรือในชั้นตัวดูดซับบางๆ
1. วิตามินบี 1 (ไทอามีน)
ก) ด้วยรีเอเจนต์ไดโซโซ
หลักการของวิธีการขั้นแรก diazobenzenesulfate (กรด diazobenzenesulfonic) เกิดขึ้น:
สารละลายไทอามีนด้วยการเติมไดโซเบนซีนซัลเฟตและอัลคาไลจะทำให้สารประกอบมีสี
ความคืบหน้า.สิ่งต่อไปนี้จะถูกเพิ่มตามลำดับในหลอดทดลอง:
b) ออกซิเดชันกับไทโอโครม
หลักการของวิธีการเมื่อสัมผัสกับ K 3 Fe(CN) 6 ในตัวกลางที่เป็นด่าง ไทอามีนจะถูกออกซิไดซ์เป็นไทโอโครมสีเหลือง ซึ่งมีแสงเรืองแสงสีน้ำเงินในแสงยูวี
ความคืบหน้า.ไทอามีนโบรไมด์หรือผงไทอามีนคลอไรด์ 10 มก. ละลายในน้ำ 5 มล. สารละลายโพแทสเซียมเหล็กซัลไฟด์ 5% K 3 Fe(CN) 6 1 มล. (โพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์) และสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 10% ถูกเพิ่มและผสม ครึ่งหนึ่งของปริมาตรผลลัพธ์จะถูกทำให้ร้อนและสังเกตการเปลี่ยนสี สีเหลืองอันเป็นผลมาจากการเปลี่ยนไทอามีนเป็นไทโอโครม เติมบิวทิลหรือไอโซเอมิลแอลกอฮอล์ 3 มล. ลงในอีกครึ่งหนึ่ง เขย่าขวดให้เข้ากันแล้วทิ้งไว้สักครู่ ชั้นแอลกอฮอล์ด้านบนจะถูกใส่ลงในภาชนะที่ทำจากแก้วที่ไม่เรืองแสงด้วยเครื่องจ่าย และตรวจด้วยแสงยูวี (หรือในรังสีของหลอดปรอทควอทซ์ในห้องมืด) เรืองแสงสีน้ำเงินมองเห็นได้ชัดเจน
c) นำสเปกตรัมการดูดกลืนแสง (โมดูล "สเปกตรัม" ซึ่งมีช่วงตั้งแต่ 350 ถึง 220 นาโนเมตร) และสังเกตค่าสูงสุดที่ แล = 250-260 นาโนเมตร บันทึกกราฟ ถ่ายโอนไปยัง Paint จากนั้นวางลงในไฟล์ “Graphs” (เอกสาร Word) เซ็นชื่อและวางลงในรายงาน ความสนใจ! ทานสเปกตรัมของวิตามินทั้งหมด พร้อมกันเพื่อเปิดและอุ่นเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์เพียงครั้งเดียว 
สเปกตรัม UV ของไทอามีน ไฮโดรคลอไรด์ (8 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในสารละลาย HCl 0.9% สูงสุดที่ 246 นาโนเมตร
2. วิตามินบี 2 (ไรโบฟลาวิน)
ก) ด้วยสังกะสีโลหะ
หลักการของวิธีการไรโบฟลาวินจะถูกรีดิวซ์โดยไฮโดรเจนที่ถูกปลดปล่อยให้เป็นลิวโคฟลาวินที่ไม่มีสี มีการเปลี่ยนสีจากเหลืองเป็นเขียวต่อมาเป็นสีแดงเข้มชมพูแล้วสีก็หายไป
ความคืบหน้า.สารแขวนลอยไรโบฟลาวิน 1 มิลลิลิตรในน้ำ (สารละลาย 0.015 - 0.025%) เทลงในหลอดทดลอง เติม HCl เข้มข้น 10 หยด และสังกะสีโลหะชิ้นหนึ่งหล่น ฟองไฮโดรเจนจะเริ่มปล่อยออกมาอย่างรวดเร็ว และของเหลวจะค่อยๆ เปลี่ยนเป็นสีชมพูหรือสีแดง จากนั้นสีของของเหลวจะเริ่มจางลงและเปลี่ยนสี (ปฏิกิริยาออกซิเดชันย้อนกลับของลิวโคฟลาวินไปเป็นไรโบฟลาวิน)
b) ด้วยซิลเวอร์ไนเตรต
หลักการของวิธีการสารละลายไรโบฟลาวินที่เป็นกลางหรือเป็นกรดเล็กน้อย (pH 6.5-7.2) ซึ่งทำปฏิกิริยากับ AgNO 3 ให้สารประกอบของโทนสีชมพูแดง ความเข้มของสีขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของวิตามิน
ความคืบหน้า.ต่อสารละลายไรโบฟลาวิน 1 มิลลิลิตร (0.015 - 0.025%) ให้เติมสารละลาย AgNO 3 0.5 มิลลิลิตร (0.1%) สีชมพูปรากฏขึ้น
c) การเรืองแสงใน UV + การดับหลังจากเติม SnCl 2 + Na 2 S 2 O 4 ซึ่งดับการเรืองแสงของวิตามินเอง แต่ไม่ใช่ของเจือปน การเรืองแสงของไรโบฟลาวินสูงสุดที่ pH 3.5-7.5 บันทึกสเปกตรัมในสารละลายโซเดียมอะซิเตต
สเปกตรัม UV ของไรโบฟลาวิน (35 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในสารละลายโซเดียมอะซิเตต CH 3 COONa
0.01% สูงสุดที่ 266.5 นาโนเมตร จุดสูงสุดเพิ่มเติมที่ 223.0 นาโนเมตร, 373.5 นาโนเมตร และ 444.5 นาโนเมตร
3. วิตามินบี 5 (พีพี, กรดนิโคตินิก)
ก) ด้วยคอปเปอร์อะซิเตท
หลักการของวิธีการเมื่อกรดนิโคตินิกถูกให้ความร้อนด้วยคอปเปอร์อะซิเตต จะเกิดการตกตะกอนของเกลือคอปเปอร์ของกรดนิโคตินิก
ความคืบหน้า.กรดนิโคตินิก 5-10 มก. ละลายเมื่อถูกความร้อนในสารละลายกรดอะซิติก 10-20 หยด 10-20 หยด (หรือเตรียมสารละลายกรดนิโคตินิก 0.75% ใน น้ำร้อนจากนั้นเติมสารละลายกรดอะซิติก 15% 1 มิลลิลิตรลงในสารละลายนี้ 2 มิลลิลิตร) ถึง ถูกทำให้ร้อนจนเดือดเติมสารละลายคอปเปอร์อะซิเตต 5% ในปริมาตรเท่ากันลงในสารละลาย ของเหลวกลายเป็นสีฟ้าขุ่น และเมื่อยืนและเย็นตัวลง จะเกิดการตกตะกอนของคอปเปอร์นิโคติเนตสีน้ำเงิน
b) กลิ่นไพริดีน
หลักการของวิธีการเมื่อให้ความร้อนกับกรดนิโคตินิกด้วย Na 2 CO 3 ที่ไม่มีน้ำจะรู้สึกได้ กลิ่นเหม็นไพริดีน
ความคืบหน้า. ในถ้วยใส่ตัวอย่างพอร์ซเลนแห้งขนาดเล็ก ผสมกรดนิโคติน 0.05 กรัมกับแอนไฮดรัสโซเดียมคาร์บอเนต 0.1-0.15 กรัม แล้วตั้งความร้อนให้ร้อน มีกลิ่นฉุนของไพริดีนปรากฏขึ้น
4. วิตามินบี 6 (ไพริดอกซิ)
ก) ด้วยเฟอร์ริกคลอไรด์
หลักการของวิธีการวิตามินบี 6 ก่อให้เกิดสารเชิงซ้อนสีแดงเลือดกับเฟอร์ริกคลอไรด์
ความคืบหน้า.สารละลายไพริดอกซิ 0.5-1% 4 มล. + 0.5 มล. 1% FeCl 3 → เขย่าแล้วสังเกตสีแดง
b) นอกจากนี้ –
c) ใช้สเปกตรัมใน 0.1 M NaOH (สังเกตค่าสูงสุดที่ แล = 245 และ 308 นาโนเมตร) หรือน้ำ (ดูรูป)
สเปกตรัม UV ของไพริดอกซิ ไฮโดรคลอไรด์ (15 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในน้ำ (pH-6.0) สูงสุดที่ 291 นาโนเมตร
5. วิตามินบี 12 – ทำให้เป็นทางการในรายงาน แต่ในทางปฏิบัติ เราไม่ได้ทำเช่นนี้เนื่องจากมีความเป็นพิษสูงของรีเอเจนต์ที่ทำงานอยู่
วิตามินบี 12 ทำปฏิกิริยากับไซยาไนด์ที่ pH = 10 ทำให้เกิดไดยาโนโคบาลามินสีม่วง เนื่องจาก Co ถูกออกซิไดซ์เป็น 3-วาเลนต์ และ 5'-ดีออกซีอะดีโนซีนจะถูกแทนที่ด้วยไอออน CN
6. วิตามินพี (ใช้รูตินเป็นตัวอย่าง)
สารที่มีฤทธิ์ของวิตามิน P ประกอบด้วยสารประกอบฟีนอลจำนวนหนึ่งซึ่งผลทางสรีรวิทยาหลักคือลดการซึมผ่านและเพิ่มความแข็งแรงของเส้นเลือดฝอย พวกเขาส่งเสริมการดูดซึมวิตามินซีในร่างกายมนุษย์และสัตว์มีส่วนร่วมอย่างแข็งขันในกระบวนการรีดอกซ์มีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระยับยั้งเหนือสิ่งอื่นใดการเกิดออกซิเดชันของอะดรีนาลีน พวกเขายังยับยั้งเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสด้วยซึ่งจะช่วยยับยั้งการสลาย กรดไฮยาลูโรนิก– เฮเทอโรโพลีแซ็กคาไรด์ในสารพื้นของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน วิต P ยับยั้งการทำงานของโคลีนเอสเตอเรส ซัคซิเนตดีไฮโดรจีเนส และเอนไซม์อื่นๆ อีกหลายชนิด
ฟลาโวนอลจำนวนหนึ่ง (รูติน, เควอซิติน), ฟลาโวโนน, คาเทชิน, คูมาริน, กรดแกลลิกและอนุพันธ์ของมัน, แอนโทไซยานิน (สารแต่งสีจากผลไม้, ผลเบอร์รี่, ดอกไม้) มีคุณสมบัติเป็นวิตามิน
สาร P-วิตามินหลายชนิดคือไกลโคไซด์ของฟลาโวนอลและฟลาโวโนนหรืออะไกลโคน (ส่วนประกอบที่ไม่ใช่คาร์โบไฮเดรตของไกลโคไซด์) ตัวอย่างเช่น รูตินคือไกลโคไซด์ซึ่งมีไดแซ็กคาไรด์ รูทิโนซิสเพิ่มอะไกลโคนที่มีโครงสร้างฟีนอลิก ฟลาโวนอล เควอซิติน
ก) ด้วยเฟอร์ริกคลอไรด์
b) ด้วยกรดซัลฟิวริก
หลักการ:กรดซัลฟิวริกเข้มข้นก่อให้เกิดเกลือออกโซเนียมที่มีฟลาโวน (รูติน) ซึ่งในสารละลายมี สีเหลือง. ฟลาวาโนน (เช่น เฮสเพอริดิน) ให้สีแดงเข้มพร้อมกำมะถัน
7. วิตามินซี
ก) ในเชิงคุณภาพ - ด้วย K 3 Fe(CN) 6
หลักการของวิธีการ:การลดลงของโพแทสเซียมเฟอร์ริไซยาไนด์ด้วยวิตามินซีโดยเปลี่ยนสีเป็นสีน้ำเงินเนื่องจากการก่อตัวของปรัสเซียนบลู
ความคืบหน้า.ในหลอดทดลองสองหลอด ให้ผสมสารละลาย 5% ของ K 3 Fe(CN) 6 5 หยด กับสารละลาย 1% ของ FeCl 3 5 หยด เติมสารละลายกรดแอสคอร์บิกหรือน้ำกะหล่ำปลี 1% 20 หยดลงในหลอดทดลองหนึ่งหลอดลงในของเหลวสีน้ำตาลแกมเขียว และเติมน้ำกลั่นในปริมาณเท่ากันลงในอีกหลอดหนึ่ง ของเหลวในหลอดทดลองหลอดแรกจะได้สีเขียวแกมน้ำเงิน และตะกอนสีน้ำเงินของปรัสเซียนบลูก็ตกตะกอน ในหลอดทดลองที่สอง (ชุดควบคุม) ของเหลวสีน้ำตาลแกมเขียวยังคงไม่เปลี่ยนแปลง
การแนะนำ
ความมุ่งมั่นของวิตามินบี 1(ทบทวนวรรณกรรม)
2 การจำแนกประเภทของวิตามิน
4 การสังเคราะห์วิตามินบี 1
วิธีการตรวจวิตามิน
1 วิธีการทางชีวภาพ
3 วิธีการทางกายภาพ
4 วิธีฟิสิกส์เคมี
การวิเคราะห์หาวิตามินบี 1(ส่วนทดลอง)
1 การหาค่าโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1
2 การหาปริมาณวิตามินบี 1 แบบ Argentometric
บทสรุป
การแนะนำ
ปัจจุบันมีผลิตภัณฑ์อาหารเสริมสำหรับมนุษย์และอาหารสัตว์จำนวนมากซึ่งเป็นสารผสมหลายองค์ประกอบแบบแห้งปรากฏอยู่ในตลาด ช่วงของผลิตภัณฑ์ดังกล่าวค่อนข้างกว้าง มันเป็นเรื่องทางชีวภาพเป็นหลัก สารเติมแต่งที่ใช้งานอยู่สำหรับอาหาร, อาหารสัตว์และนก, การเตรียมวิตามินรวม เกณฑ์สำหรับคุณภาพของผลิตภัณฑ์ดังกล่าวอาจเป็นการวิเคราะห์เนื้อหาของวิตามินและโดยเฉพาะอย่างยิ่งวิตามินที่สำคัญเช่นวิตามินที่ละลายน้ำได้และละลายในไขมันซึ่งปริมาณดังกล่าวได้รับการควบคุมโดยเอกสารกำกับดูแลและมาตรฐานคุณภาพด้านสุขอนามัย
วิตามินอยู่ในกลุ่มสารประกอบอินทรีย์ประเภทต่างๆ ดังนั้นปฏิกิริยากลุ่มทั่วไปจึงไม่สามารถเกิดขึ้นได้สำหรับพวกเขา วิตามินแต่ละชนิดต้องใช้วิธีวิเคราะห์พิเศษ
โครงสร้างทางเคมีของวิตามินบี 1(วิตามินต้านโรคประสาทอักเสบ, อะนูริน, วิตามินโรคเหน็บชา, วิตามินต้านโรคเหน็บชา) ช่วยให้สามารถใช้วิธีต่างๆ ในการกำหนดเชิงปริมาณทางเคมีและเคมีกายภาพ:
การไตเตรทกรด-เบส การไตเตรทแบบตกตะกอน (อาร์เจนโตเมทรี) เทคนิคเคมีกายภาพ (สเปกโตรโฟโตเมตริก) กราวิเมทรี
วัตถุประสงค์ของงานหลักสูตรนี้คือการกำหนดปริมาณวิตามินบีในเชิงปริมาณ 1. เลือกวิธีการกำหนดเชิงปริมาณสองวิธี - วิธีเคมีและเคมีกายภาพ
วัตถุประสงค์ของงานรายวิชา: วิเคราะห์วรรณกรรม ดำเนินการตรวจวัดปริมาณไทอามีนสองครั้ง - การไทเทรตแบบโพเทนชิโอเมตริก และวิธีการอาร์เจนโตเมตริก
1. การหาปริมาณวิตามินบี 1 (ทบทวนวรรณกรรม)
1 ภูมิหลังทางประวัติศาสตร์
คำที่รู้จักกันดีว่า "วิตามิน" มาจากภาษาละติน "vita" ซึ่งแปลว่าชีวิต สารประกอบอินทรีย์ต่างๆ เหล่านี้ไม่ได้ได้รับชื่อนี้โดยบังเอิญ: บทบาทของวิตามินในชีวิตของร่างกายนั้นยอดเยี่ยมมาก
วิตามินเป็นกลุ่มของสารเคมีที่มีโครงสร้างหลากหลายซึ่งมีส่วนร่วมในปฏิกิริยาต่างๆ ของการเผาผลาญของเซลล์ พวกเขาจะไม่ ส่วนประกอบโครงสร้างสิ่งมีชีวิตและไม่ได้ใช้เป็นแหล่งพลังงาน วิตามินส่วนใหญ่ไม่ได้สังเคราะห์ในร่างกายของมนุษย์และสัตว์ แต่บางชนิดถูกสังเคราะห์โดยจุลินทรีย์และเนื้อเยื่อในลำไส้ในปริมาณที่น้อยที่สุด ดังนั้นแหล่งที่มาหลักของสารเหล่านี้คืออาหาร
เมื่อช่วงครึ่งหลังของคริสต์ศตวรรษที่ 19 ก็ได้มีการเปิดเผยว่า คุณค่าทางโภชนาการปริมาณของผลิตภัณฑ์อาหารถูกกำหนดโดยเนื้อหาของสารต่อไปนี้เป็นหลัก: โปรตีน ไขมัน คาร์โบไฮเดรต เกลือแร่ และน้ำ
อย่างไรก็ตาม การปฏิบัติไม่ได้ยืนยันความถูกต้องของแนวคิดที่ฝังแน่นเกี่ยวกับคุณประโยชน์ทางชีวภาพของอาหารเสมอไป
การพิสูจน์เชิงทดลองและการวางนัยทั่วไปทางทฤษฎี-วิทยาศาสตร์ของศตวรรษนี้ ประสบการณ์จริงเกิดขึ้นได้เป็นครั้งแรกด้วยการวิจัยของนักวิทยาศาสตร์ชาวรัสเซีย Nikolai Ivanovich Lunin
เขาได้ทำการทดลองกับหนูโดยแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม เขาเลี้ยงกลุ่มหนึ่งด้วยนมธรรมชาติทั้งหมด และอีกกลุ่มหนึ่งรับประทานอาหารสังเคราะห์ซึ่งประกอบด้วยเคซีนโปรตีน น้ำตาล ไขมัน เกลือแร่ และน้ำ
หลังจากผ่านไป 3 เดือน หนูกลุ่มที่สองก็ตาย แต่หนูกลุ่มแรกยังคงมีสุขภาพดี ประสบการณ์ครั้งนี้แสดงให้เห็นว่านอกจากนั้น สารอาหารสำหรับการทำงานปกติของร่างกายจำเป็นต้องมีส่วนประกอบอื่น ๆ นี่เป็นการค้นพบทางวิทยาศาสตร์ที่สำคัญซึ่งหักล้างตำแหน่งที่เป็นที่ยอมรับในสาขาวิทยาศาสตร์โภชนาการ
การยืนยันความถูกต้องของข้อสรุปของ N.I. Lunin โดยการระบุสาเหตุของโรคเหน็บชา
ในปี พ.ศ. 2439 หมออังกฤษ Aickman สังเกตเห็นว่าไก่ที่เลี้ยงด้วยข้าวขัดเงาเป็นโรคทางประสาทที่คล้ายคลึงกับโรคเหน็บชาในมนุษย์ หลังจากให้ข้าวกล้องไก่แล้วโรคก็หยุดลง เขาสรุปว่าวิตามินนั้นมีอยู่ในเปลือกเมล็ดธัญพืช ในปี 1911 นักวิทยาศาสตร์ชาวโปแลนด์ Casimir Funk ได้แยกวิตามินในรูปผลึก โครงสร้างสุดท้ายของวิตามินบี 1ได้รับการติดตั้งในปี พ.ศ. 2516
ตามคุณสมบัติทางเคมีของสารนี้เป็นของ สารประกอบอินทรีย์และมีหมู่อะมิโน ฟังก์เชื่ออย่างนั้นทั้งหมด สารที่คล้ายกันจำเป็นต้องรวมกลุ่มเอมีนด้วยเขาเสนอให้เรียกวิตามินสารที่ไม่รู้จักเหล่านี้เช่น เอมีนแห่งชีวิต ต่อมาพบว่าหลายชนิดไม่มีกลุ่มเอมีน แต่คำว่า “วิตามิน” มีรากฐานมาจากวิทยาศาสตร์และการปฏิบัติ
ตามคำจำกัดความคลาสสิก วิตามินเป็นสารอินทรีย์โมเลกุลต่ำที่จำเป็นสำหรับชีวิตปกติ ซึ่งไม่ได้สังเคราะห์โดยสิ่งมีชีวิตในสายพันธุ์ที่กำหนดหรือสังเคราะห์ในปริมาณที่ไม่เพียงพอต่ออายุขัยของร่างกาย วิตามินจำเป็นต่อการทำงานปกติของเกือบทั้งหมด กระบวนการทางชีวเคมีในร่างกายของเรา
2 การจำแนกประเภทของวิตามิน
การจำแนกประเภทที่ทันสมัยวิตามินไม่สมบูรณ์ มันขึ้นอยู่กับ คุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมี(โดยเฉพาะความสามารถในการละลาย) หรือโดยธรรมชาติของสารเคมี วิตามินที่ละลายในไขมันและละลายน้ำได้นั้นขึ้นอยู่กับความสามารถในการละลายในตัวทำละลายอินทรีย์ที่ไม่มีขั้วหรือในสภาพแวดล้อมที่เป็นน้ำ ในการจำแนกประเภทของวิตามินที่กำหนด นอกเหนือจากการกำหนดตัวอักษรแล้ว ผลกระทบทางชีวภาพหลักยังระบุอยู่ในวงเล็บ บางครั้งอาจมีคำนำหน้าว่า "ต่อต้าน" ซึ่งบ่งบอกถึงความสามารถ ของวิตามินชนิดนี้ป้องกันหรือขจัดการพัฒนาของโรคที่เกี่ยวข้อง
วิตามินที่ละลายในไขมัน
วิตามินแอล (ยาต้านจุลชีพ); เรตินอล
วิตามินดี (แอนติไคติก); แคลเซียม
วิตามินอี (ต้านการฆ่าเชื้อ, วิตามินคูณ); โทโคฟีรอล
วิตามินเค (ป้องกันเลือด); แนฟโทควิโนน
วิตามินที่ละลายน้ำได้
.วิตามินบี 1(โรคประสาทอักเสบ); วิตามินบี
.วิตามินบี 2(วิตามินการเจริญเติบโต); ไรโบฟลาวิน
.วิตามินบี 6(ต้านผิวหนังอักเสบ, อะเดอร์มิน); ไพริดอกซิ
.วิตามินบี 12(ป้องกันโลหิตจาง); ไซยาโนโคบาลาเมีย; โคบาลามิน
.วิตามินพีพี (ยาต้านเพลลากริติก, ไนอาซิน); นิโคตินาไมด์
.วิตามินเอช (สารต้านเชื้อรา, ปัจจัยการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย, ยีสต์และเชื้อรา); ไบโอติน
.วิตามินซี (แอนตี้คอร์บิวติก): กรดแอสคอร์บิก
3 โครงสร้างและคุณสมบัติของวิตามินบี 1
วิตามินบี 1-ไทอามีนคือเกลือไฮโดรคลอไรด์ของ 4-เมทิล-5- ?-ออกซีเอทิล-N-(2-เมทิล-4-อะมิโน-5-เมทิลไพริมิดิล)-ไทอาโซเลียม คลอไรด์ได้มาจากการสังเคราะห์ โดยทั่วไปจะอยู่ในรูปของเกลือไฮโดรคลอไรด์หรือไฮโดรโบรไมด์ โครงสร้างประกอบด้วยระบบเฮเทอโรไซคลิก เช่น ไพริมิดิลและไทอาโซล
วิตามินบี 1 เป็นผงผลึกสีขาวที่มีรสขม มีกลิ่นเฉพาะตัว ละลายได้ในน้ำ (1 กรัมต่อ 1 มก.) กรดอะซิติกน้ำแข็ง และเอทิลแอลกอฮอล์ ในสภาพแวดล้อมที่มีน้ำเป็นกรดสูง ไทอามีนมีความเสถียรสูงและไม่ถูกทำลายโดยตัวออกซิไดซ์ที่มีพลังเช่นไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ โพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนต และโอโซน ที่ pH=3.5 ไทอามีนสามารถให้ความร้อนได้ถึงอุณหภูมิ 120 º โดยไม่มีสัญญาณการสลายตัวที่เห็นได้ชัดเจน
วิตามินบี 1 สามารถออกซิเดชั่นได้ ในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่าง ภายใต้อิทธิพลของเกลือในเลือดแดง ไทอามีนจะเปลี่ยนเป็นไทโอโครม การแปลงไทอามีนเป็นไทโอโครมเป็นกระบวนการเชิงปริมาณที่ไม่สามารถย้อนกลับได้
ปฏิกิริยานี้เป็นพื้นฐานของหนึ่งในนั้น วิธีการเชิงปริมาณความมุ่งมั่นของวิตามินบี 1 การเปลี่ยนไทอามีนเป็นไทโอโครมจะมาพร้อมกับการสูญเสียความจุวิตามิน
1.4 การสังเคราะห์
พิจารณาคุณสมบัติโครงสร้างของวิตามินบี 1การสังเคราะห์สามารถทำได้สามวิธี: การควบแน่นของส่วนประกอบไพริมิดีนและไทอาโซล ขึ้นอยู่กับส่วนประกอบไพริมิดีนและขึ้นอยู่กับส่วนประกอบไทอาโซล
ลองพิจารณาตัวเลือกแรก ส่วนประกอบทั้งสองถูกสังเคราะห์แบบคู่ขนานแล้วจึงรวมกันเป็นโมเลกุลไทอามีน โดยเฉพาะอย่างยิ่ง 2-เมทิล-4-อะมิโน-5 คลอโรเมทิลไพริมิดีนทำปฏิกิริยากับ 4-เมทิล-5-ไฮดรอกซีเอไทอาโซลเพื่อสร้างเกลือไทอาโซลควอเตอร์นารี:
การควบแน่นเกิดขึ้นที่อุณหภูมิ 120 0C ในโทลูอีนหรือบิวทิลแอลกอฮอล์ ต่อไป ไทอามีนที่ได้จะถูกแยกออกจากส่วนผสมของปฏิกิริยาโดยการตกตะกอนด้วยอะซิโตนและทำให้บริสุทธิ์โดยการตกผลึกซ้ำจากเมทานอล
5 การแพร่กระจายในลักษณะและการประยุกต์
ไทอามีนมีอยู่ทั่วไปทุกหนทุกแห่งและพบได้ในตัวแทนของธรรมชาติที่มีชีวิตหลายชนิด ตามกฎแล้วปริมาณของมันในพืชและจุลินทรีย์จะมีมูลค่าสูงกว่าในสัตว์มาก นอกจากนี้ในกรณีแรกวิตามินจะถูกนำเสนอเป็นส่วนใหญ่ในรูปแบบอิสระและในรูปแบบที่สอง - ในรูปแบบฟอสโฟรีเลชั่น ปริมาณไทอามีนในอาหารพื้นฐานจะแตกต่างกันไปค่อนข้างมาก ขึ้นอยู่กับสถานที่และวิธีการรับวัตถุดิบ ลักษณะของการประมวลผลทางเทคโนโลยีของผลิตภัณฑ์ขั้นกลาง เป็นต้น
ในเมล็ดพืชธัญญาหาร วิตามินบีเหมือนส่วนใหญ่ วิตามินที่ละลายน้ำได้ที่มีอยู่ในเปลือกและเอ็มบริโอ การแปรรูปวัตถุดิบจากพืช (การกำจัดรำ) มักจะมาพร้อมกับการลดลงอย่างมากของระดับวิตามินในผลิตภัณฑ์ที่เกิดขึ้น เช่น ข้าวขัดเงาไม่มีวิตามินเลย
วิตามินบี 1 มีการใช้กันอย่างแพร่หลายใน การปฏิบัติทางการแพทย์เพื่อการรักษาโรคต่างๆ โรคทางประสาท(โรคประสาท, โรคประสาทอักเสบ), โรคหลอดเลือดหัวใจ (ความดันโลหิตสูง) ฯลฯ
การเสริมผลิตภัณฑ์เบเกอรี่และอาหารสัตว์ผสมในการเลี้ยงปศุสัตว์และสัตว์ปีก
ความต้องการรายวันผู้ใหญ่จะได้รับวิตามินบีเฉลี่ย 2-3 มก 1. แต่ความต้องการนั้นขึ้นอยู่กับองค์ประกอบและปริมาณแคลอรี่รวมของอาหาร อัตราการเผาผลาญ และความเข้มข้นในการทำงานเป็นอย่างมาก ความเด่นของคาร์โบไฮเดรตในอาหารทำให้ร่างกายต้องการวิตามินมากขึ้น ในทางกลับกันไขมันจะลดความต้องการนี้ลงอย่างมาก
2. วิธีการตรวจวิตามิน
วิธีการศึกษาวิตามินทั้งหมดแบ่งออกเป็นทางชีววิทยา (จุลชีววิทยา) กายภาพ เคมี และเคมีกายภาพ
1 วิธีการทางชีวภาพ
แม้ว่าวิธีการทางชีววิทยาในการตรวจหาวิตามินบางชนิดจะมีความไวสูงและสามารถใช้เพื่อศึกษาตัวอย่างที่มีสารประกอบเหล่านี้ในระดับต่ำได้ แต่ปัจจุบันเป็นวิธีที่น่าสนใจทางประวัติศาสตร์เป็นหลัก วิธีการเหล่านี้มีความแม่นยำต่ำ นอกจากนี้ วิธีการทางชีวภาพยังใช้เวลานานและมีราคาแพงและไม่สะดวกสำหรับการวิเคราะห์แบบอนุกรม
วิธีการทางจุลชีววิทยาขึ้นอยู่กับการวัดอัตราการเติบโตของแบคทีเรียซึ่งเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของวิตามินในวัตถุที่กำลังศึกษา
2.2 วิธีทางเคมี
ความจำเพาะของคุณสมบัติของวิตามินเกิดจากการมีกลุ่มฟังก์ชันอยู่ในโมเลกุล คุณสมบัตินี้ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิเคราะห์ทางเคมีเชิงปริมาณและเชิงคุณภาพ
วิธีการวิเคราะห์ทางเคมี:
) โฟโตเมตริก;
) ไทไตรเมตริก (ประกอบด้วยความจริงที่ว่าสารทั้งหมดทำปฏิกิริยากันในปริมาณที่เท่ากัน C * V = ค *วี );
3) Gravimetric (ประกอบด้วยการแยกสารในรูปแบบบริสุทธิ์และชั่งน้ำหนัก ส่วนใหญ่แล้วการแยกดังกล่าวจะดำเนินการโดยการตกตะกอน โดยทั่วไปแล้ว องค์ประกอบที่กำหนดจะถูกแยกออกในรูปแบบของสารประกอบระเหย (วิธีการกลั่น) สัญญาณการวิเคราะห์ -มวล);
) ทางแสง (ขึ้นอยู่กับการดูดซับพลังงานรังสีจำนวนหนึ่งโดยอะตอมโดยระบบ ปริมาณพลังงานการดูดซับจะขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสารในสารละลายโดยตรง)
3 วิธีการทางกายภาพ
การใช้วิธีทางกายภาพในการวิเคราะห์วิตามิน (เช่น PMR) ถูกจำกัดด้วยเครื่องมือที่มีราคาสูง
Conductometric - ขึ้นอยู่กับการวัดค่าการนำไฟฟ้าของสารละลาย
โพเทนชิโอเมตริก (วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการวัดการพึ่งพาศักย์สมดุลของอิเล็กโทรดต่อกิจกรรม (ความเข้มข้น) ของไอออนที่ตรวจพบของไอออนที่ตรวจพบ สำหรับการวัดจำเป็นต้องเปรียบเทียบองค์ประกอบจากอิเล็กโทรดตัวบ่งชี้ที่เหมาะสมและการอ้างอิง อิเล็กโทรด)
สเปกตรัมมวล - ใช้ด้วยความช่วยเหลือขององค์ประกอบที่แข็งแกร่งและสนามแม่เหล็ก ส่วนผสมของก๊าซจะถูกแยกออกเป็นส่วนประกอบตามอะตอมหรือมวลโมเลกุลของส่วนประกอบ ใช้ในการศึกษาส่วนผสมของไอโซโทป ก๊าซเฉื่อย และส่วนผสมของสารอินทรีย์
4 วิธีฟิสิกส์เคมี
ปัจจุบันในทางปฏิบัติของการวิเคราะห์ทางเภสัชกรรมมีการใช้วิธีการวิเคราะห์ทางเคมีกายภาพมากขึ้นเนื่องจากมีความแม่นยำและรวดเร็วที่สุดในการดำเนินการ ซึ่งรวมถึงวิธีการวิเคราะห์แบบออปติคอล ไฟฟ้าเคมี และโครมาโตกราฟี
ในบรรดาวิธีการทางแสง วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกและโฟโตคัลเลอร์ริเมตริก หลักการทั่วไป- การมีอยู่ของความสัมพันธ์ตามสัดส่วนโดยตรงระหว่างการดูดกลืนแสงของสารละลายและความเข้มข้นของสารที่ละลาย ภายในขีดจำกัดความเข้มข้นที่ทราบ การวิเคราะห์สเปกโตรโฟโตเมตริกโดยการวัดโดยตรงของความหนาแน่นของแสงสามารถดำเนินการได้สำหรับสารที่มีคุณสมบัติทางโครงสร้างบางอย่าง โครงสร้างจะต้องมีกลุ่มโครโมฟอร์และออกโซโครมิก (เช่น เฮเทอโรอะตอม ระบบพันธะคอนจูเกต)
ข้อดีของวิธีการวัดสี (โฟโตเมตริก) ได้แก่ ความพร้อมใช้งานของอุปกรณ์และเครื่องมือวัด และความรวดเร็ว ข้อเสียเปรียบหลักคือการเลือกต่ำซึ่งป้องกันการประยุกต์ใช้วิธีการเหล่านี้กับวัตถุที่มีองค์ประกอบที่ซับซ้อน อิทธิพลของส่วนประกอบที่ตามมาได้รับผลกระทบ: โพรวิตามิน, สารต้านอนุมูลอิสระ, อนุพันธ์ของวิตามิน, ผลิตภัณฑ์ทำลายวิตามินซึ่งสามารถผลิตผลิตภัณฑ์ที่มีสีได้เช่นเดียวกับวิตามิน พบกับความยากลำบากเมื่อเลือกรีเอเจนต์เฉพาะสำหรับการโต้ตอบกับวิตามินเฉพาะ
แม้ว่าวิธีนี้จะมีข้อเสีย แต่ก็มีการพัฒนาวิธีการตรวจวัดด้วยแสงสำหรับวิตามินหลายชนิด
แม้จะมีวิธีการที่หลากหลายในการวัดปริมาณแสงของวิตามิน แต่นักวิทยาศาสตร์ยังคงสนใจวิธีการนี้ โดยผสมผสานวิธีการเก่าและสร้างวิธีการใหม่ขึ้นมา
วิธีการวิเคราะห์ด้วยโครมาโตกราฟีเป็นเรื่องปกติมากในการปฏิบัติงานด้านเภสัชกรรม วิธีการเหล่านี้มีแนวโน้มดีสำหรับการวิเคราะห์สารที่มีวิตามินและมีโครงสร้างที่ซับซ้อน
จนกระทั่งเมื่อไม่นานมานี้ วิธีโครมาโตกราฟีที่ใช้กันมากที่สุดคือโครมาโตกราฟีแบบแก๊ส-ของเหลว (GLC)
ตอนนี้ ทางเลือกอื่นการตรวจวัดวิตามินอย่างรวดเร็วในวัตถุต่างๆ คือ โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)
การหาปริมาณวิตามินด้วยโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงไม่จำเป็นต้องเตรียมตัวอย่างเป็นเวลานาน ความไวของวิธีนี้ค่อนข้างสูง แต่อุปกรณ์ที่มีราคาสูงจะจำกัดการใช้วิธีนี้อย่างมาก
วิธีการวิเคราะห์เคมีไฟฟ้าขึ้นอยู่กับการใช้การแลกเปลี่ยนไอออนหรือกระบวนการแลกเปลี่ยนทางไฟฟ้าที่เกิดขึ้นบนพื้นผิวของอิเล็กโทรดหรือในพื้นที่อิเล็กโทรด สัญญาณการวิเคราะห์คือพารามิเตอร์ทางไฟฟ้าใดๆ (ศักย์ กระแสไฟฟ้า ความต้านทาน ค่าการนำไฟฟ้า ฯลฯ) ที่เกี่ยวข้องกับหน้าที่กับองค์ประกอบและความเข้มข้นของสารละลาย
การเล่นวิธีวิเคราะห์เคมีไฟฟ้า บทบาทสำคัญในร้านขายยาสมัยใหม่ เนื่องจากมีความไวสูง ขีดจำกัดการตรวจจับต่ำ และเนื้อหาที่ตรวจพบได้หลากหลาย วิธีการที่พบบ่อยที่สุดคือโพลาโรกราฟีและโวลแทมเมทรี ข้อมูลวรรณกรรมเกี่ยวกับการศึกษาโพลาโรกราฟีของวิตามินมีมากที่สุด ในทางโพลาโรกราฟี เป็นไปได้ที่จะกำหนดปริมาณเชิงปริมาณของวิตามินแต่ละชนิดในแต่ละชนิดและเชิงซ้อนได้ ยา.
วิธีการนี้ค่อนข้างละเอียดอ่อน แต่การใช้โพลาโรกราฟีถูกจำกัดด้วยการใช้อิเล็กโทรดปรอทที่เป็นพิษ
ในเวลาเดียวกัน วิธีการไทเทรตแบบโพเทนชิโอเมตริกทำได้รวดเร็ว ใช้งานง่าย และไม่ต้องใช้อุปกรณ์และรีเอเจนต์ราคาแพง
3. ส่วนทดลอง
1 การหาค่าโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1
โครงสร้างของวิตามินบี 1รวมถึงคลอรีนเคลื่อนที่ (ค 12เอ็น 18ON4 Cl 2ส):
โพเทนชิโอเมตริกการไตเตรทวิตามินไทอามีน
ซึ่งทำให้สามารถใช้การไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกแบบตกตะกอนเพื่อตรวจวัดไทอามีนได้ อิเล็กโทรดสีเงินถูกใช้เป็นอิเล็กโทรดตัวบ่งชี้ ไทแทรนต์คือสารละลายซิลเวอร์ไนเตรตที่มีความเข้มข้น 0.05 โมล/ลิตร
สำหรับการวิเคราะห์ได้เตรียมสารละลายที่มีวิตามินบีเข้มข้น 10.02968โมล/ลิตร ในการทำเช่นนี้ ปริมาณ 10 หลอดบรรจุจะถูกถ่ายโอนในขวดขนาด 50 มล. ในเชิงปริมาณและนำไปที่เครื่องหมายด้วยน้ำกลั่น ปริมาตรของหลอดคือ 1 มล. ปริมาณวิตามินบี 1 - 50 มก. (ผู้ผลิต: OJSC Moskhimfarmpreparaty ตั้งชื่อตาม N.A. Semashko) นำส่วนลงตัวจำนวน 5 มิลลิลิตรและดำเนินการไทเทรตแบบโพเทนชิโอเมตริก ปริมาตรที่เท่ากันของสารละลายซิลเวอร์ไนเตรตเมื่อไตเตรทสารละลายวิตามิน 5 มล. คือ 6 มล. ทำการวัดโพเทนชิโอเมตริก 8 ครั้ง
ตัวอย่างของเส้นโค้งการไตเตรทแสดงไว้ในรูปที่ 1, 2, 3, 4, 5 เส้นโค้งการไทเทรตถูกพล็อตในพิกัด - เส้นโค้งอินทิกรัล V, mL - E, W และเส้นโค้งดิฟเฟอเรนเชียลในพิกัด - ? วี-
รูปที่ 1 กราฟการไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1(วี อัล =5 มล.)
รูปที่ 2 กราฟการไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1(วี อัล =5 มล.)
รูปที่ 3 กราฟการไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1(วี อัล =5 มล.)
รูปที่ 4 กราฟการไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1(วี อัล =5 มล.)
รูปที่ 5 กราฟการไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริกของวิตามินบี 1(วี อัล =5 มล.)
โดยที่ TAGNO3/vit.B1.= (0.05*337)/1000=0.01685กรัม/มิลลิลิตร; Ve คือปริมาตรของซิลเวอร์ไนเตรตที่ใช้สำหรับการไทเทรต
ที่ไหนวี ขวด = 50มล. ต AgNO3/วิต.B1 =0.008425g/ml, V เอ่อ - ปริมาตรของซิลเวอร์ไนเตรตที่ใช้สำหรับการไตเตรท, V อัล = 5 มล., N - จำนวนหลอด (10 ชิ้น)
ผลการวิเคราะห์แสดงไว้ในตารางที่ 1
ตารางที่ 1. ผลการวิเคราะห์การไทเทรตแบบโพเทนชิโอเมตริก
No.V, mla, mgm, g160.10110,05055260.10110,0505536.50,10950,05476460.10110,05055560.10110,05055660.10110,05055760.10110,05055860.10 1 10.05055<среднее>6,06250,102150,051076
โดยที่ x คือค่า "น่าสงสัย" (อาจพลาดได้) - นี่คือค่าสูงสุดหรือต่ำสุดของกลุ่มตัวอย่าง x ใกล้ที่สุด - ค่าที่ใกล้เคียงกับที่น่าสงสัยมากที่สุด x นาที และ x สูงสุด - ค่าตัวอย่างสูงสุดและต่ำสุด ค่า Q ถูกเปรียบเทียบกับค่าตาราง (ตารางที่ 2) ความน่าจะเป็นของความเชื่อมั่นจะเท่ากับ 0.90 หรือ 0.95 ถ้าถาม>ถาม โต๊ะ - ผลลัพธ์ที่น่าสงสัยถือว่าพลาดและถูกแยกออกจากการพิจารณาเพิ่มเติม ถาม< Qโต๊ะ - ผลลัพธ์ที่น่าสงสัยไม่พลาด
ตารางที่ 2. ค่าวิกฤตของเกณฑ์ Q สำหรับระดับความเชื่อมั่นต่างๆ p และจำนวนการวัด n
np0.900.950.9930.9410.9700.99440.7650.8290.92650.6420.7100.82160.5600.6250.74070.5070.5680.68080.4680.5260.63490.4370.4930. 5 98100.4120.4660.568
การคำนวณ: n=8; р=0.90;= =1.0>0.468 เกณฑ์บ่งชี้ว่าผลลัพธ์คือพลาดและเราไม่คำนึงถึงเรื่องนี้
หากไม่รวมค่าที่พลาด เราจะได้ m = 0.05055 g ตาม เอกสารกำกับดูแลปริมาณวิตามินบี 1 ควรเท่ากับ 0.05 กรัม
ข้อผิดพลาดคือ:
X= 0.05055-0.05= 0.00055 กรัม
1,1%
.ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานที่แสดงลักษณะการกระจายของผลลัพธ์ QCA:
ตารางที่ 3. ตารางเสริมสำหรับการคำนวณค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน
ม ฉัน ม ฉัน - (ม ฉัน - )2S0,050550,050550000,050550,050550000,050550,050550000,050550,050550000,050550,050550000,050550,050550000,050550,05055000
.ช่วงความเชื่อมั่น:
0,05055
3.2 การหาค่าอาร์เจนโตเมตริกของวิตามินบี 1
การหาค่าอาร์เจนโตเมตริกโดยใช้วิธีไฟเอนซ์ วิธีการเผาเป็นวิธีการไตเตรทโดยตรงของเฮไลด์ด้วยสารละลาย AgNO30.1 M ในตัวกลางที่มีความเป็นกรดเล็กน้อย โดยใช้ตัวบ่งชี้การดูดซับที่แสดงการเปลี่ยนสีไม่ใช่ในสารละลาย แต่อยู่บนพื้นผิวของตะกอน เราใช้สารละลายที่เตรียมไว้สำหรับวิธีแรกในการวัดปริมาณไทอามีนโดยมีความเข้มข้นของวิตามิน 0.02968 โมล/ลิตร วาล= 5 มล. เติมสารละลายโบรโมฟีนอลบลู 2-3 หยดและกรดอะซิติกเจือจางทีละหยดจนได้สีเหลืองแกมเขียว สารละลายที่เป็นผลลัพธ์ถูกไทเทรตด้วยสารละลายซิลเวอร์ไนเตรต 0.1 โมลาร์ให้เป็นสีม่วง
การไตเตรทเป็นไปตามสมการ:
(กับ 12เอ็น 17เอ็น 4OS)Cl - .HCl +2AgNO 3= 2AgCl + (C 12เอ็น 17เอ็น 4ระบบปฏิบัติการ)NO3 - .เอชเอ็นโอ 3
ตารางที่ 4. ผลลัพธ์ของการวัดอาร์เจนโตเมตริกของวิตามินบี 1
เลขที่V , mlm, g11.50.0505521.50.0505531.50.0505541.50.0505551.40.0471861.50.0505571.50.0505581.50.0505591.40.04718101.50.05055<среднее>1,480,04988
ผลลัพธ์ที่นำเสนอบ่งชี้ถึงการมีอยู่ของค่าผิดปกติ เราพิจารณาการพลาดโดยใช้เกณฑ์ Q: สถิติการทดสอบตามเกณฑ์ Q คำนวณโดยใช้สูตร:
การคำนวณ: n=10; พี=0.90;
> เกณฑ์ 0.412 บ่งชี้ว่าผลลัพธ์ไม่ผ่าน และเราจะไม่นำมาพิจารณาในการคำนวณเพิ่มเติม
1.การก่อตั้ง AgNO titer 3 0.1 N ตามสารละลาย NaCl 0.1 N
= ;
ปริมาตร V AgNO 3, ไปไตเตรท, มล.
2.ข้อผิดพลาดคือ:
X= 0.05055 -0.05= 0.00055 กรัม
1,1%
การประมวลผลทางคณิตศาสตร์ของผลลัพธ์ QCA (การวิเคราะห์ทางเคมีเชิงปริมาณ)
.ค่าเบี่ยงเบนกำลังสองเฉลี่ยที่แสดงลักษณะการแพร่กระจายของผลลัพธ์ของการวิเคราะห์เชิงปริมาณ
ตารางที่ 5. ตารางเสริมสำหรับการคำนวณค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน
ม ฉัน ม ฉัน - (ม ฉัน - )2S0.050550.050550000.050550.050550000.050550.050550000.050550.050550000.050550.050550000.050550.050550000.050550.050550000.05 0550.05055000
.ช่วงความเชื่อมั่น:
ขีดจำกัดบนและล่างของช่วงเวลาที่ข้อผิดพลาดของผลลัพธ์ QCA อยู่ที่ความน่าจะเป็นของความเชื่อมั่น 0.95 ถูกกำหนดดังนี้:
0,05055
บทสรุป
ในเรื่องนี้ งานหลักสูตรงานคือการวัดปริมาณวิตามินบี 1. ใช้วิธีการต่างๆ เพื่อกำหนดวิตามิน นอกจากนี้ยังจำเป็นต้องคำนึงถึงด้วย โครงสร้างทางเคมีวิตามินแต่ละชนิด วิธีการวิเคราะห์แบบออพติคัลที่ใช้กันอย่างแพร่หลายคือรีเอเจนต์ที่ใช้แรงงานเข้มข้น ใช้เวลานาน และมีราคาแพง การใช้วิธีการโครมาโตกราฟีมีความซับซ้อนเนื่องจากการใช้อุปกรณ์ราคาแพง เลือกวิธีการกำหนดไทอามีนสองวิธี:
.การไตเตรทแบบโพเทนชิโอเมตริก ซึ่งมีข้อดีหลายประการเหนือวิธีการวิเคราะห์เภสัชภัณฑ์สำหรับปริมาณวิตามินที่มีอยู่: วิธีนี้ง่าย รวดเร็ว ไม่ต้องใช้อุปกรณ์ราคาแพง การใช้รีเอเจนต์เพียงเล็กน้อย และไม่คำนึงถึงอิทธิพลของปัจจัยเชิงอัตนัย
วิธีนี้มีข้อผิดพลาด 1.1%
.การไทเทรตประกอบด้วยข้อเท็จจริงที่ว่าสารทั้งหมดทำปฏิกิริยากันในปริมาณที่เท่ากัน C*V = ค *วี
ในวิธีการหาไทอามีนนี้ ข้อผิดพลาดคือ 1.1%
ช่วงความเชื่อมั่น: 0.05055
บรรณานุกรม
1. ชีวเคมี: หนังสือเรียนมหาวิทยาลัย ฉบับพิมพ์ครั้งที่ 3 แบบเหมารวม / วี.พี. โคมอฟ; วี.เอ็น. Shvedova M.: อีแร้ง, 2551. -638 หน้า
เคมีของวิตามิน / V.M. เบเรซอฟสกี้ ม.: “ อุตสาหกรรมอาหาร", 2516. -632 น.
หนังสือเคมีวิเคราะห์พื้นฐาน 2 วิธีวิเคราะห์เคมี / Yu.A. Zolotov "โรงเรียนมัธยม" ปี; 2545. -494 น.
4. เคมีวิเคราะห์ หนังสือเรียน / น.ย. เข้าสู่ระบบนอฟ; เอ.จี. โวสครีเซนสกี; เป็น. โซโลดคิน-. อ.: “การตรัสรู้” 2518.- 478 หน้า
5. มิเคียวา อี.วี. การหาค่าโวลแทมเมตริกของวิตามินบีที่ละลายน้ำได้ 1และบี 2ในปุ๋ยและอาหารสัตว์เสริม/ E. V. Mikheeva, L. S. Anisimova // วัสดุของการประชุมครั้งที่ 6 “ การวิเคราะห์ของไซบีเรียและตะวันออกไกล”, Novosibirs.-2000.-p.367
วิธีการทางเคมีใน การวิเคราะห์เชิงปริมาณ ยา: คำแนะนำที่เป็นระบบสำหรับนักศึกษาชั้นปีที่ 5 ใน “การควบคุมคุณภาพยา” / มหาวิทยาลัยแพทยศาสตร์และเภสัชศาสตร์แห่งรัฐ ตั้งชื่อตาม N. Testemitanu. - คีชีเนา - 2008
GOST 29138-91
8. แอล.เอ็น. คอร์ซัน, G.N. บาโตโรวา, E.T. Pavlova/- การประมวลผลทางคณิตศาสตร์ของผลลัพธ์ของการทดลองทางเคมี: หนังสือเรียนสำหรับนักศึกษาสาขาเคมี การแพทย์ และชีววิทยาเฉพาะทาง - อูลาน-อูเด - 2011. - 70 น.
กวดวิชา
ต้องการความช่วยเหลือในการศึกษาหัวข้อหรือไม่?
ผู้เชี่ยวชาญของเราจะแนะนำหรือให้บริการสอนพิเศษในหัวข้อที่คุณสนใจ
ส่งใบสมัครของคุณระบุหัวข้อในขณะนี้เพื่อค้นหาความเป็นไปได้ในการรับคำปรึกษา
บทนำ……………………………………………………………………2
1. ภาพรวมทั่วไปของวิธีการตรวจวิตามิน…………3
2. วิธีโครมาโตกราฟีในการหาวิตามิน…………5
3. วิธีเคมีไฟฟ้าในการหาวิตามิน…………10
4. การปอกวิธีการกำหนดโวลแทมเมทริก
วิตามินที่ละลายน้ำได้ บี 1 บี 2 ในผลิตภัณฑ์อาหาร………..13
สรุป…………………………………………...18
การแนะนำ
ปัจจุบันมีผลิตภัณฑ์อาหารเสริมสำหรับมนุษย์และอาหารสัตว์จำนวนมากซึ่งเป็นสารผสมหลายองค์ประกอบแบบแห้งปรากฏอยู่ในตลาด ช่วงของผลิตภัณฑ์ดังกล่าวค่อนข้างกว้าง ประการแรกคือวัตถุเจือปนอาหารออกฤทธิ์ทางชีวภาพ พรีมิกซ์ อาหารสำหรับสัตว์และนก และการเตรียมวิตามินรวม เกณฑ์สำหรับคุณภาพของผลิตภัณฑ์ดังกล่าวอาจเป็นการวิเคราะห์เนื้อหาของวิตามินและโดยเฉพาะอย่างยิ่งวิตามินที่สำคัญเช่นวิตามินที่ละลายน้ำได้และละลายในไขมันซึ่งปริมาณดังกล่าวได้รับการควบคุมโดยเอกสารกำกับดูแลและมาตรฐานคุณภาพด้านสุขอนามัย
ใช้วิธีการต่างๆ เพื่อกำหนดวิตามิน วิธีการวิเคราะห์แบบออพติคัลที่ใช้กันอย่างแพร่หลายคือรีเอเจนต์ที่ใช้แรงงานเข้มข้น ใช้เวลานาน และมีราคาแพง การใช้วิธีการโครมาโตกราฟีมีความซับซ้อนเนื่องจากการใช้อุปกรณ์ราคาแพง ทุกๆ ปีการแบ่งประเภทจะขยายออกไปและการผลิตอาหารก็เพิ่มขึ้น สูตรอาหารก็ได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้น อาหารเด็ก. ในทางกลับกัน ความต้องการในการตรวจสอบคุณภาพของผลิตภัณฑ์และปรับปรุงวิธีการตรวจวัดวิตามินก็เพิ่มขึ้น ข้อกำหนดทางการแพทย์และชีวภาพและ มาตรฐานด้านสุขอนามัยคุณภาพของวัตถุดิบอาหารและผลิตภัณฑ์อาหารแสดงถึงคุณค่าทางโภชนาการของผลิตภัณฑ์อาหารทารกประเภทและกลุ่มส่วนใหญ่เพื่อวัตถุประสงค์ต่างๆ
1. ภาพรวมทั่วไปของวิธีการตรวจวิตามิน
วิตามินเกือบทั้งหมดเกิดปฏิกิริยาออกซิเดชัน ไอโซเมอไรเซชันได้ง่าย และถูกทำลายภายใต้อิทธิพลของอุณหภูมิ แสง ออกซิเจนในบรรยากาศ ความชื้น และปัจจัยอื่นๆ
จาก วิธีการที่มีอยู่สำหรับการกำหนดวิตามินซี (กรดแอสคอร์บิก) วิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดคือการไตเตรทด้วยภาพและโพเทนชิโอเมตริกด้วยสารละลาย 2,6-di-chlorophenolindophenol ตาม GOST 24556-81 โดยพิจารณาจากคุณสมบัติการลดของกรดแอสคอร์บิกและความสามารถในการ ลด 2,6-DCPIP สีน้ำเงินเข้มของตัวบ่งชี้นี้จะไม่มีสีเมื่อเติมกรดแอสคอร์บิก การเตรียมสารสกัดของผลิตภัณฑ์ที่อยู่ระหว่างการศึกษาเป็นสิ่งสำคัญ สารสกัดที่ดีที่สุดคือสารละลายกรดเมตาฟอสฟอริก 6% ซึ่งจะไปยับยั้งแอสคอร์บิกแอซิดออกซิเดสและตกตะกอนโปรตีน
แคโรทีนในวัสดุจากพืช สารเข้มข้น และเครื่องดื่มไม่มีแอลกอฮอล์ควบคุมโดยวิธีเคมีกายภาพตาม GOST 8756.22-80 วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการกำหนดโฟโตเมตริกของเศษส่วนมวลของแคโรทีนในสารละลายที่ได้รับระหว่างการสกัดจากผลิตภัณฑ์ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ สารละลายจะถูกทำให้บริสุทธิ์ในขั้นแรกจากสารที่ให้สีที่มาพร้อมกันโดยใช้คอลัมน์โครมาโทกราฟี แคโรทีนละลายได้ง่ายในตัวทำละลายอินทรีย์ (อีเทอร์ น้ำมันเบนซิน ฯลฯ) และทำให้เกิดสีเหลือง สำหรับการวัดปริมาณแคโรทีน จะใช้โครมาโทกราฟีแบบดูดซับบนคอลัมน์ที่มีอะลูมิเนียมออกไซด์และแมกนีเซียมออกไซด์ การกำหนดเม็ดสีบนคอลัมน์นี้ขึ้นอยู่กับกิจกรรมของตัวดูดซับ ปริมาณของเม็ดสี และการมีอยู่ของส่วนประกอบอื่นๆ ในส่วนผสมที่ถูกแยกออกจากกัน ส่วนผสมที่แห้งของอะลูมิเนียมออกไซด์จะคงแคโรทีนไว้ และส่วนผสมที่เปียกจะทำให้สารแต่งสีอื่นๆ เข้าไปในสารละลายได้
ไทอามีนส่วนใหญ่พบในสถานะที่ถูกผูกไว้ในรูปแบบของไดฟอสฟอรัสเอสเทอร์ - โคคาร์บอกซิเลส ซึ่งเป็นกลุ่มออกฤทธิ์ของเอนไซม์หลายชนิด ด้วยความช่วยเหลือของกรดไฮโดรไลซิสและภายใต้อิทธิพลของเอนไซม์ ไทอามีนจะถูกปล่อยออกมาจากสถานะที่ถูกผูกไว้ วิธีนี้กำหนดปริมาณไทอามีน ในการคำนวณปริมาณวิตามินบี 1 จะใช้วิธีการฟลูออโรเมตริกซึ่งใช้ในการกำหนดไทอามีนในผลิตภัณฑ์อาหาร ขึ้นอยู่กับความสามารถของไทอามีนในการสร้างในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่างด้วยเฟอร์ริคาไนด์คาลาเนียมไทโอโครม ซึ่งให้แสงเรืองแสงที่รุนแรงในบิวทิลแอลกอฮอล์ ความเข้มข้นของกระบวนการได้รับการตรวจสอบโดยใช้ฟลูออโรมิเตอร์ EF-ZM
ในอาหารและเครื่องดื่ม ไรโบฟลาวินมีอยู่ในสถานะผูกมัด กล่าวคือ อยู่ในรูปของฟอสฟอรัสเอสเทอร์ที่จับกับโปรตีน ในการกำหนดปริมาณของไรโบฟลาวินในอาหารจำเป็นต้องปล่อยไรโบฟลาวินออกจากสถานะที่ถูกผูกไว้โดยการไฮโดรไลซิสของกรดและการรักษาด้วยการเตรียมเอนไซม์ วิตามินบี 1 ในน้ำอัดลมคำนวณโดยใช้วิธีทางเคมีเพื่อกำหนดปริมาณของไรโบฟลาวินในรูปแบบที่ไฮโดรไลซ์ได้ง่ายและเกาะติดกันแน่นในเนื้อเยื่อ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความสามารถของไรโบฟลาวินในการเรืองแสงก่อนและหลังรีดักชันด้วยโซเดียมไฮโปซัลไฟต์ การหาปริมาณรวมของสารประกอบฟีนอล ในการทำเช่นนี้ให้ใช้วิธีการวัดสี Folin-Denis ซึ่งขึ้นอยู่กับการก่อตัวของสารประกอบเชิงซ้อนสีน้ำเงินในระหว่างการลดกรด tungstic ภายใต้อิทธิพลของโพลีฟีนอลด้วยรีเอเจนต์ในตัวกลางที่เป็นด่าง สารประกอบฟีนอลิกถูกกำหนดโดยกรดคลอโรจีนิกโดยใช้โฟโตเมทรีเปลวไฟโดยใช้อุปกรณ์ EKF-2
2. วิธีโครมาโตกราฟีในการหาวิตามิน
เมื่อเร็วๆ นี้ วิธีการโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงได้รับการพัฒนาอย่างรวดเร็วในต่างประเทศ สาเหตุหลักมาจากการกำเนิดของโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีความแม่นยำและการปรับปรุงเทคนิคการวิเคราะห์ การใช้วิธี HPLC อย่างแพร่หลายในการตรวจวัดวิตามินก็สะท้อนให้เห็นในจำนวนสิ่งพิมพ์เช่นกัน จนถึงปัจจุบัน มากกว่าครึ่งหนึ่งของผลงานตีพิมพ์ทั้งหมดเกี่ยวกับการวิเคราะห์วิตามินที่ละลายในน้ำและไขมันเน้นไปที่การใช้วิธีนี้ โครมาโตกราฟีหลากหลายรูปแบบได้แพร่หลายในการตรวจหาวิตามิน
ในการชำระโทโคฟีรอลจากสิ่งเจือปนจากต่างประเทศจะใช้วิธีการโครมาโทกราฟีแบบชั้นบาง เมื่อใช้ร่วมกับวิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกและฟลูออริเมทริกวิธีนี้ยังใช้ในการตรวจวัดวิตามินอีในเชิงปริมาณเมื่อทำการแยกจะใช้แผ่นที่มีไซลูโฟลและดินเบา
การวิเคราะห์โทโคฟีรอลไอโซเมอร์ใน น้ำมันมะกอกดำเนินการโดยโครมาโทกราฟีแบบแก๊ส-ของเหลว เทคนิคการวิเคราะห์ GC และ GLC จำเป็นต้องมีการผลิตอนุพันธ์ที่ระเหยได้ ซึ่งเป็นเรื่องยากมากเมื่อวิเคราะห์วิตามินที่ละลายในไขมัน ด้วยเหตุนี้วิธีการกำหนดเหล่านี้จึงไม่มีการใช้กันอย่างแพร่หลาย การตรวจวัดวิตามินอีในผลิตภัณฑ์อาหาร ยา และวัตถุทางชีวภาพดำเนินการในโหมดเกรเดียนต์และไอโซคราติสทั้งในสภาวะปกติและเฟสย้อนกลับ ซิลิกาเจล (SG), kieselguhr, silasorb, ODS-Hypersil และตัวพาอื่น ๆ ถูกนำมาใช้เป็นตัวดูดซับ สำหรับการตรวจสอบองค์ประกอบของอีลูเอตในโครมาโตกราฟีของเหลวอย่างต่อเนื่องเมื่อวิเคราะห์วิตามินและเพิ่มความไวในการกำหนด UV (A = 292 นาโนเมตร) สเปกโตรโฟโตเมตริก (X = 295 นาโนเมตร) ฟลูออเรสเซนต์ (X = 280/325 นาโนเมตร) เคมีไฟฟ้า PMR และแมสสเปกโทรสโกปีเป็นเครื่องตรวจจับ
นักวิจัยส่วนใหญ่ชอบใช้โครมาโทกราฟีแบบดูดซับเพื่อแยกส่วนผสมของโทโคฟีรอลทั้งแปดไอโซเมอร์และอะซิเตตของไอโซเมอร์เหล่านั้น ในกรณีเหล่านี้ เฟสเคลื่อนที่มักเป็นไฮโดรคาร์บอนที่มีอีเทอร์ในปริมาณเล็กน้อย ตามกฎแล้ววิธีการที่ระบุไว้ในการพิจารณาวิตามินอีไม่ได้จัดให้มีการซาพอนิฟิเคชั่นเบื้องต้นของตัวอย่างซึ่งจะช่วยลดเวลาในการวิเคราะห์ได้อย่างมาก
การแยกด้วยการกำหนดปริมาณวิตามินที่ละลายในไขมัน (A, D, E, K) พร้อมกันเมื่อมีอยู่ร่วมกันใน การเตรียมวิตามินรวมดำเนินการทั้งในเฟสตรงและเฟสย้อนกลับ อย่างไรก็ตาม นักวิจัยส่วนใหญ่ชอบที่จะใช้ HPLC เวอร์ชันย้อนกลับ วิธี HPLC ช่วยให้คุณวิเคราะห์วิตามิน B1 และ B2 ที่ละลายในน้ำได้พร้อมกันและแยกกัน สำหรับการแยกวิตามิน จะใช้ HPLC เวอร์ชันรีเวิร์สเฟส ไอออนคู่ และการแลกเปลี่ยนไอออน มีการใช้ทั้งโหมดโครมาโตกราฟีแบบไอโซคราติคและแบบเกรเดียนต์ การแยกสารวิเคราะห์เบื้องต้นออกจากเมทริกซ์จะดำเนินการโดยการไฮโดรไลซิสของเอนไซม์และกรดของตัวอย่าง
ข้อดีของวิธีโครมาโตกราฟีของเหลว:
การตรวจจับส่วนประกอบหลายชิ้นพร้อมกัน
ขจัดอิทธิพลของส่วนประกอบที่รบกวน
คอมเพล็กซ์สามารถสร้างขึ้นใหม่ได้อย่างรวดเร็วเพื่อทำการวิเคราะห์อื่นๆ
องค์ประกอบและคุณลักษณะของอุปกรณ์และซอฟต์แวร์สำหรับโครมาโตกราฟีของเหลว "Khromos ZH-301":
ตารางที่ 1
|
ข้อดีของโครมาโตกราฟี "Chromos ZH-301":
การออกแบบปั๊มแรงดันสูงมีความเสถียรและความแม่นยำสูงในการรักษาอัตราการไหลของตัวชะ
มั่นใจในการเข้าถึงคอลัมน์ได้ง่ายด้วยการออกแบบอุปกรณ์
มั่นใจได้ถึงประสิทธิภาพของการแยกโดยการใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟีประสิทธิภาพสูง
ช่วงเชิงเส้นที่กว้างของสัญญาณการวัดของเครื่องตรวจจับโดยไม่ต้องเปลี่ยนขีดจำกัดการวัด ซึ่งช่วยให้คุณสามารถวัดจุดสูงสุดของความเข้มข้นทั้งสูงและต่ำได้อย่างแม่นยำสูง
การวิเคราะห์โครมาโตแกรมของวิตามินที่ละลายในน้ำ:
1 กรดแอสคอร์บิก (C)
2 กรดนิโคตินิก (ไนอาซิน)
3 ไพริดอกซิ (B6),
4 ไทอามีน (B1)
5 นิโคตินาไมด์ (B3),
6 กรดโฟลิก (M)
7 ไซยาโนโคบาลามิน (B12),
8 ไรโบฟลาวิน (B2)
การวิเคราะห์โครมาโตแกรมของวิตามินที่ละลายในไขมัน:
1. วิตามินเอ
2.โทคอล
3. y-โทโคฟีรอ
4. เอ-โทโคฟีรอล (วิตามินอี)
5.ลูทีน
6. ซีแซนทีน
7. คริปโตแซนธิน
8.เอ-แคโรทีน
แม้ว่าวิธี HPLC จะมีความไวสูง แต่เครื่องมือที่มีต้นทุนสูง ตลอดจนระยะเวลาของการวิเคราะห์เมื่อคำนึงถึงเวลาเตรียมตัวอย่าง ก็ได้จำกัดการใช้งานในห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ในประเทศของเราอย่างมาก
ประสบการณ์ 1.การกำหนดปริมาณวิตามินซี
หลักการของวิธีการ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับความสามารถของวิตามินซีในการลด 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล ซึ่งมีสีแดงในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด และจะเปลี่ยนสีเมื่อลดลง ในสภาพแวดล้อมที่เป็นด่างสีจะเป็นสีน้ำเงิน เพื่อป้องกันวิตามินซีจากการถูกทำลาย สารละลายทดสอบจะถูกไตเตรทในตัวกลางที่เป็นกรดด้วยสารละลายอัลคาไลน์ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล จนกระทั่งกลายเป็นสีชมพู
ในการคำนวณปริมาณวิตามินซีในผลิตภัณฑ์ เช่น กะหล่ำปลี มันฝรั่ง ต้นสน โรสฮิป ฯลฯ ให้ใช้สูตร:
ที่ไหน เอ็กซ์– ปริมาณกรดแอสคอร์บิก หน่วยเป็นมิลลิกรัมต่อผลิตภัณฑ์ 100 กรัม 0.088 – ปริมาณแอสคอร์บิกแอซิด, มก.; ก– ผลลัพธ์ของการไตเตรทด้วยสารละลาย 0.001 N ของ 2,6-ไดคลอโรฟีโนลินโดฟีนอล, มล.; บี –ปริมาตรของสารสกัดที่ใช้สำหรับการไตเตรท, มล.; ใน -จำนวนผลิตภัณฑ์ที่นำมาวิเคราะห์ g; ช– จำนวนสารสกัดทั้งหมด, มล.; 100 – การแปลงต่อ 100 กรัมของผลิตภัณฑ์
สรุป: เขียนผลการทดลองและข้อมูลที่คำนวณได้
การทดลอง 1.1. การกำหนดปริมาณวิตามินซีในกะหล่ำปลี
ลำดับงาน.
ชั่งน้ำหนักกะหล่ำปลี 1 กรัมบดในครกด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 10% 2 มล. (HCl - กรดไฮโดรคลอริก, กรดไฮโดรคลอริก, กรดไฮโดรคลอริก) เติมน้ำ 8 มล. และกรอง วัดตัวกรองสำหรับการไตเตรท 2 มล. เติมสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 10% 10 หยดและไตเตรทด้วย 2,6-dichlorophenolindophenol จนกระทั่งสีชมพูคงอยู่เป็นเวลา 30 วินาทีตามนี้ หลักการของวิธีการปฏิกิริยา คำนวณปริมาณวิตามินซีในกะหล่ำปลี 100 กรัมโดยใช้สูตรที่ให้ไว้ข้างต้น กะหล่ำปลี 100 กรัม มีวิตามินซี 25-60 มก. โรสฮิป 100 กรัม 500-1500 มก. และเข็มสน 200-400 มก.
การทดลอง 1.2. การหาปริมาณวิตามินซีในมันฝรั่ง
ลำดับงาน.
ชั่งน้ำหนักมันฝรั่ง 5 กรัมบดในครกด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 10% 20 หยด (เพื่อไม่ให้มันฝรั่งเข้มขึ้น) ค่อยๆ เติมน้ำกลั่น - 15 มล. มวลที่ได้จะถูกเทลงในแก้ว ปูนจะถูกล้างด้วยน้ำ เทลงบนแท่งแก้วลงในแก้ว และไตเตรทด้วย 0.001 N สารละลาย 2,6-dichlorophenolindophenol ให้เป็นสีชมพูตามนี้ หลักการของวิธีการปฏิกิริยา มันฝรั่ง 100 กรัม มีวิตามินซี 1-5 มก.
สรุป: เขียนผลการทดลอง
การทดลอง 1.3 การหาปริมาณวิตามินซีในปัสสาวะ
การกำหนดปริมาณวิตามินซีในปัสสาวะช่วยให้ทราบถึงปริมาณวิตามินนี้ในร่างกายเนื่องจากมีความสอดคล้องกันระหว่างความเข้มข้นของวิตามินซีในเลือดกับปริมาณของวิตามินนี้ที่ถูกขับออกทางปัสสาวะ อย่างไรก็ตาม ด้วยภาวะ hypovitaminosis C ปริมาณของกรดแอสคอร์บิกในปัสสาวะจะไม่ลดลงเสมอไป มักเป็นเรื่องปกติแม้ว่าจะมีการขาดวิตามินนี้ในเนื้อเยื่อและอวัยวะก็ตาม
ในคนที่มีสุขภาพดี การให้วิตามินซี 100 มก. ทางปากอย่างรวดเร็วทำให้ความเข้มข้นของวิตามินซีในเลือดและปัสสาวะเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็ว ด้วยภาวะ hypovitaminosis C เนื้อเยื่อที่ขาดวิตามินซีจะคงวิตามินซีที่กินเข้าไปและความเข้มข้นของวิตามินซีในปัสสาวะจะไม่เพิ่มขึ้น ปัสสาวะของคนที่มีสุขภาพแข็งแรงประกอบด้วยวิตามินซี 20-30 มก. หรือ 113.55-170.33 µmol/วัน ในเด็กระดับวิตามินนี้จะลดลงเมื่อมีเลือดออกตามไรฟันรวมถึงโรคติดเชื้อเฉียบพลันและเรื้อรัง